Myo5a特異性片段克隆、原核表達(dá)及蛋白純化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文Myo5a特異性片段克隆、原核表達(dá)及蛋白純化姓名：游荷花申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：沈敬華額爾敦20100501oCloning，ProkaryoticExpressionandPurificationofhumanMy05aAbstractObjectiveToconstructtheprokaryoticexpressionvectorofPGEX4T3／MyoSa，inducetheexpres

2、sionoftherecombinantfusionproteininEcoliBL21，andpu曲therecombinantfusionproteinMethodsPCRwasusedtoobtainfourcodingregionofMyoSageneTheMyoSagenewasdigestedbyrestrictiveenzymeBamHIandXhoI，Thegenewasinsertedintotheprokaryofi

3、cGSTfusionproteinexpressionplasmidpGEX4T一3，toformPGEX一4T一3／MyoSaAfterrestrictionenzymedigestionidentification，polymerasechainreaction(PCR)amplificationandsequencin，thePGEX4T3／MyoSaplasmidcontainingthecorrecttargetDNAfrag

4、mentsWagobtainedandtransformedintoEcoliB121(DE3)Byrestrictionen—zyrnedigestionandsequencing，thepositivetransformedcloneswereidentifiedTheexpres—sionofPGEX4T一3／MyoSafusionprotein懈inducedwithIPTG，andtheproductswereanalyzed

5、bySDS—PAGEandWesternblottingTheproteinswerepurifiedthroughaffinitychromatographyResultsTheresultsofdigestionandsequencingindicatedthattherecombinantPmkaryoticPGEX4T3／MyoSavectorwassuccessfullyconstructedAftertransformati

6、onwithPGEX4T3／MyoSaandinductionwithWIG，therecombinanttargetproteinofa_bout30kDWasobtainedbySDS—PAGEanalysis，whichwasconsistentwithouranticipationWesternblottingsuggestedthatthenewbandWaspurifiedrecombinantPGEX4T3／MyoSapr

7、oteinandpossessedgoodimmunogenicityConclusionThepmkaryoticexpressionvectorofhumanMyoSagenehasbeensuccessfullyconstructedThePGEX4T一3／MyoSafusionproteincouldbeexpressedinpmkaryoticexpressionsystemofEcoliPurifiedrecombinant

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