醫(yī)學(xué)免疫學(xué)檢驗(yàn)考試重點(diǎn)

1、1醫(yī)學(xué)免疫學(xué)檢驗(yàn)考試重點(diǎn)醫(yī)學(xué)免疫學(xué)檢驗(yàn)考試重點(diǎn)概論抗原抗體反應(yīng)1免疫學(xué)基本概念及其生物學(xué)功能；免疫：機(jī)體識(shí)別和排斥抗原性異物的一種生理功能免疫三大功能：免疫防御、免疫自穩(wěn)、免疫監(jiān)視中樞免疫器官（骨髓和胸腺）外周免疫器官（淋巴結(jié)、脾臟、扁桃體）免疫細(xì)胞：淋巴細(xì)胞（T，B，NK）、單核巨噬細(xì)胞、其他免疫應(yīng)答細(xì)胞（中性粒、嗜酸性、嗜堿性和肥大細(xì)胞）免疫分子：免疫球蛋白（IgM，IgG，IgA，IgE，IgD），補(bǔ)體，細(xì)胞因子，細(xì)胞黏附分子，人

2、類白細(xì)胞分化抗原免疫應(yīng)答：機(jī)體免疫系統(tǒng)接受抗原刺激發(fā)生的一系列反應(yīng)，并以排出或分解該抗原為目的的反應(yīng)過(guò)程。過(guò)程：抗原的識(shí)別、處理、信息傳遞（識(shí)別階段），免疫細(xì)胞的激活、增殖、分化（活化階段）以及產(chǎn)生一系列的免疫效應(yīng)因子（效應(yīng)階段）。臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)：研究免疫學(xué)檢測(cè)理論、技術(shù)、應(yīng)用，免疫疾病發(fā)病機(jī)制、免疫診斷、及防治的一門(mén)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用學(xué)科。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，免疫學(xué)技術(shù)有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補(bǔ)體參與的反應(yīng)、中和反應(yīng)和標(biāo)記免

3、疫反應(yīng)五種類型。免疫檢驗(yàn)：1）利用免疫檢測(cè)原理和技術(shù)檢測(cè)免疫活性細(xì)胞、抗原、抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子、細(xì)胞黏附分子等免疫相關(guān)物質(zhì)；2）體液中的微量物質(zhì)如激素、酶、血漿微量蛋白、血液藥物濃度、微量元素。臨床免疫學(xué)：利用免疫學(xué)理論和技術(shù)研究疾病的免疫病理機(jī)制、診斷和鑒別診斷、療效評(píng)價(jià)、預(yù)后判斷和預(yù)防的多個(gè)分支學(xué)科的總稱。免疫性疾?。焊鞣N原因引起的機(jī)體免疫應(yīng)答異常所致的疾病，包括超敏反應(yīng)性疾病、自身免疫病、免疫缺陷病和免疫增生病。感染免疫學(xué)：研究

4、病原微生物與宿主相互關(guān)系從而控制感染的學(xué)科，傳統(tǒng)免疫學(xué)核心。腫瘤免疫學(xué)：研究腫瘤免疫原性、機(jī)體抗腫瘤的免疫效應(yīng)及機(jī)體的免疫功能與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的相互關(guān)系以及腫瘤免疫診斷與防治的學(xué)科。移植免疫學(xué)：研究移植物與宿主相互關(guān)系從而選擇移植物和延長(zhǎng)移植物存活的學(xué)科。2血清學(xué)反應(yīng)的概念；抗體主要存在于血清中，體外的抗原抗體反應(yīng)稱為血清學(xué)反應(yīng)。抗原抗體反應(yīng)：抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)，特異性取決于抗原表位和抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互

5、補(bǔ)性與親和性，并通過(guò)靜電引力、范德華引力、氫鍵結(jié)合力和疏水作用力等非共價(jià)鍵結(jié)合在一起。3抗原抗體的反應(yīng)原理Ag決定簇和Ab分子超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性；分子表面特異的可逆的弱結(jié)合力；親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體親和力（affinity）是抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)抗原表位之間相互適應(yīng)而存在的引力。這是抗原與抗體之間固有的結(jié)合力。親合力（avidity)是指反應(yīng)系統(tǒng)中整個(gè)抗原分子與相應(yīng)抗體之間的結(jié)合能力。親和力與親和性、抗體的結(jié)合價(jià)和抗原的

6、抗原決定簇?cái)?shù)目相關(guān)。親和力越大，抗原抗體結(jié)合越牢固。K=抗原抗體復(fù)合物濃度（游離抗原濃度游離抗體濃度）K值大的抗體與抗原牢固結(jié)合，不易解離，說(shuō)明該抗體有高親和力。親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體：血清學(xué)反應(yīng)條件下，抗原抗體均帶負(fù)電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體。當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，表面電荷減少，水化層變薄，失去親水性能，抗原抗體復(fù)合物成為疏水膠體。電解質(zhì)作用下，中和膠體表面電荷，使疏水膠體靠攏，形成可見(jiàn)的抗原抗體復(fù)合物。34.

7、刺激淋巴細(xì)胞增生分化，從而增強(qiáng)和擴(kuò)大免疫應(yīng)答能力。應(yīng)用佐劑的缺點(diǎn)：佐劑?；煊形⒘科渌镔|(zhì)，這些物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)后也可引起抗體的產(chǎn)主，影響抗血清的特異性；注射佐劑可引起局部形成肉芽腫和無(wú)菌性膿腫；反復(fù)注射，易發(fā)生超敏反應(yīng)，使局部組織壞死，甚至引起動(dòng)物死亡。4免疫血清制備動(dòng)物的選擇1.抗原與免疫動(dòng)物種屬差異越遠(yuǎn)越好；2.動(dòng)物個(gè)體選擇:適齡、健壯、無(wú)感染正常動(dòng)物、體重合乎要求；3.抗原性質(zhì):酶類—豚鼠；甾體激素—家兔4.血清用途:R型:等價(jià)帶寬適

8、于診斷試劑.用家兔免疫產(chǎn)生.H型:等價(jià)帶窄適于免疫治療.用馬免疫產(chǎn)生.5.抗血清需要量選擇免疫方法1.免疫劑量：1)不能過(guò)大或過(guò)小，否則產(chǎn)生免疫耐受；2)首次免疫劑量不宜過(guò)大3)大:0.51mg只小:0.10.6mg只免疫途徑:1）皮內(nèi)或皮下注射：a.采用多點(diǎn)注射(810點(diǎn))；b.半抗原宜皮內(nèi)多點(diǎn)注射；c.皮內(nèi)注射易引起細(xì)胞反應(yīng)，對(duì)提高抗體效價(jià)有利，但皮內(nèi)注射較困難(因佐劑加入后粘度大)。2）腹腔和靜脈注射:多用于顆粒性抗原和加強(qiáng)免疫。

9、3）淋巴結(jié)內(nèi)注射:適宜于微量抗原(先用完全佐劑在足掌作基礎(chǔ)免疫)。免疫時(shí)間：1）間隔約1020天（宜長(zhǎng)、否則導(dǎo)致免疫耐受）；2）二次以后每次間隔7~10天（過(guò)長(zhǎng)→刺激變?nèi)酢贵w效價(jià)不高。）3)一般接種58次，不超過(guò)2個(gè)月；4)半抗原的免疫間隔要求較長(zhǎng)(30~40天)。如8次免疫后仍不產(chǎn)生抗體，則應(yīng)更換動(dòng)物。采血及試血頸動(dòng)脈采血法：家兔、綿羊、山羊；心臟采血法：家兔、豚鼠、大鼠、雞；靜脈采血法：家兔、山羊、綿羊免疫血清的純化：免疫血清是成

10、分復(fù)雜的混合物，除有特異性和非特異性抗體，還有各種蛋白成分抗血清——硫酸銨鹽析多次（粗提）——親和層析，離子交換層析，凝膠過(guò)濾——IgG類抗體（不純）——親和層析，吸附法——特異性IgG抗體抗體的鑒定：1.效價(jià)的鑒定：抗體含量測(cè)定。根據(jù)抗原性質(zhì)不同，顆粒性抗原可采用凝集試驗(yàn)。可溶性抗原常用免疫雙擴(kuò)散法2抗體的純度鑒定：SDSPAGE。若只出現(xiàn)一條蛋白電泳區(qū)帶說(shuō)明抗體純化已達(dá)到要求，而出現(xiàn)多條蛋白區(qū)帶則表明抗血清中混有雜蛋白，必須進(jìn)一步純

11、化。3.特異性鑒定：抗體對(duì)相應(yīng)或相似抗原識(shí)別能力一般用特異性抗原及其相似的抗原與待鑒定抗體進(jìn)行免疫雙擴(kuò)散試驗(yàn)。如果出現(xiàn)交叉反應(yīng)，說(shuō)明有雜抗體存在?？蓱?yīng)用相應(yīng)抗原吸收雜抗體，即可得到單價(jià)特異性抗體。4抗體親和力鑒定：親和力高則靈敏度好:親和力測(cè)定主要有平衡透析法、酶聯(lián)免疫法和放射分析法。親和力的高低是由抗原分子和抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)、抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。免疫血清的保存：1.4℃保存：可保存3～6個(gè)月2.低溫保存：20～40

12、℃，可保存2～3年。抗體的保存濃度為20～30mgml為宜，加入110000的硫柳汞或11000的疊氮鈉防腐，并加入等體積的中性甘油，分裝小瓶，置20℃以下低溫保存。3.冰凍干燥保存：可保存5～10年4單克隆抗體的概念每一克隆B細(xì)胞所產(chǎn)生的理化性狀高度均一、組成均一、只與同一種抗原決定族反應(yīng)的抗體。5淋巴雜交瘤技術(shù)的基本原理雜交瘤技術(shù)：在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無(wú)限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞

13、雜交瘤。6單克隆抗體的制備流程1、親本細(xì)胞的選擇（骨髓瘤細(xì)胞：BALBC小鼠骨髓瘤NS1細(xì)胞株和SP20細(xì)胞株，致敏B細(xì)胞：免疫脾細(xì)胞，每次抗原用量100μg）2、細(xì)胞融合（細(xì)胞融合劑——PEG種類:分子量1000、1500、4000的PEG是最常用的細(xì)胞融合劑；作用機(jī)理：誘導(dǎo)細(xì)胞膜上脂類物質(zhì)結(jié)構(gòu)重排，使細(xì)胞膜易打開(kāi)而有助于細(xì)胞融合；作用特點(diǎn)：隨機(jī)發(fā)生的，不同廠商、批號(hào)、分子量的PEG，其純度與毒性有所不同。）3、雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng)