db21∕t 2534-2015 鹿流行性出血病病毒熒光pcr檢測方法

1、ICS65.020.30B41DB21遼寧省地方標準DB21T2534—2015鹿流行性出血病病毒熒光PCR檢測方法MethodoftherealtimeRTPCRfthedetectionofepizootichaemrhagicdiseaseofdeer20151015發(fā)布20151215實施遼寧省質量技術監(jiān)督局發(fā)布DB21T2534—2015鹿流行性出血病病毒實時熒光PCR檢測方法1范圍本標準規(guī)定了鹿流行性出血病病毒（Epizoo

2、ticHaemrhagicDiseaseVirusofdeer）實時熒光PCR檢測方法。本標準適用于鹿流行性出血病病毒的檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GBT6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法SNT1193基因檢驗實驗室技術要求3縮略語下列縮略語適用于本文件。Ct值：每個反應管內的熒光信號

3、達到設定的閾值時所經歷的循環(huán)數。DEPC：焦碳酸乙二酯（Diethylpyrocarbonate）Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）實時熒光PCR：熒光逆轉錄聚合酶鏈反應（RealTimeFluescentQuantitativeReverseTranionPolymeraseChainReaction）4原理采用TaqMan方法，比對鹿流行性出血病病毒基因

4、組S基因的核苷酸序列，設計特異性引物和特異性的熒光雙標記探針進行配對。探針5端標記FAM熒光素為報告熒光基團（用R表示），3端標記TAMRA熒光素為淬滅熒光基團（用Q表示），它在近距離內能吸收5端熒光基因發(fā)出的熒光信號。PCR反應進入退火階段時，引物和探針同時與目的基因片段結合，此時探針上R基團發(fā)出的熒光信號被Q基因所吸收，儀器檢測不到熒光信號；而反應進行到延伸階段時，Taq酶的5到3的外切核酸酶功能將探針降解。這樣探針上的R基團游離出