氯苯降解菌CB-2的降解特性及質粒特性的研究.pdf

1、本實驗從大連瑞澤農藥公司的廢水中篩選到了一株氯苯高效降解菌，并對其進行了菌種鑒定、生長曲線測定、抗性及最佳降解條件測定，同時對菌株質粒的提取、質粒的消除及質粒消除后菌株的降解特性進行了探究。主要實驗結果如下：
　　 (一)氯苯降解菌的降解特性研究
　　 1、菌種的分離和鑒定
　　 實驗篩選到一株氯苯高效降解菌，該菌株能夠以氯苯為唯一碳源進行生長。運用掃描電鏡、生理生化檢測及16SrDNA序列分析，鑒定該菌株為腸桿

2、菌屬(Enterobacter.)。其對鏈霉素不敏感，具有抗性，而對實驗中所選用的其他抗生素都比較敏感，不具有抗性。
　　 2、氯苯降解菌CB-2最佳降解條件
　　 氯苯降解菌CB-2降解氯苯的最佳條件為：底物濃度120 mg/L，pH7.0，溫度30℃，搖床轉速120rpm，接種量為5％。在上述最適培養(yǎng)條件下，該菌株對氯苯降解率可達75％。
　　 (二)氯苯降解菌CB-2的質粒特性的研究
　　 1、質粒

3、提取
　　 對于野生菌株需要選擇合適的方法進行質粒提取，實驗采用了堿裂解法、煮沸法和SDS法三種方法進行質粒提取，結果顯示，SDS法提取效果最好，所得到的質粒帶與檢測到的質粒帶結果一致，質粒的大小約為23kb。SDS法是一種相對比較溫和的質粒提取方法，適合于大質粒的提取。煮沸法的操作雖然快捷，但反應劇烈，對大質粒的破壞相當嚴重，所以實驗中沒有提取到質粒；常規(guī)堿裂解法對質粒也有不同程度的損壞，提取到的質粒濃度不高，效果也不理想。<

4、br>　　 2、質粒消除
　　 為了考察質粒的功能，本文采用了吖啶橙、SDS和苯甲酸鈉三種消除劑進行質粒消除。結果表明SDS可以消除質粒，質粒消除后的菌株在氯苯無機鹽培養(yǎng)基上難以生長。而苯甲酸鈉和吖啶橙質粒消除效果不好。
　　 3、質粒消除后菌株的降解特性
　　 經SDS質粒消除后的氯苯降解菌CB-2對氯苯的耐受力和降解率明顯下降，這表明該質粒與氯苯的降解代謝過程有關，其降解基因在質粒上，隨著質粒的消除，其利用