美國(guó)藥典微生物限度檢測(cè)

1、16161微生物限度檢測(cè)微生物限度檢測(cè)（MICROBIALMICROBIALLIMITLIMITTESTSTESTS）此章提供方法來檢測(cè)可能存在的好氧微生物其他制藥過程中可能出現(xiàn)的微生物的數(shù)量，包括原材料和成品中的。如果經(jīng)過驗(yàn)證確認(rèn)可以得到相同或更好的檢測(cè)結(jié)論，也允許采用自動(dòng)化的檢測(cè)方法。在樣品檢測(cè)過程中須進(jìn)行無菌操作。若無特別說明，則“培養(yǎng)（incubate）”一詞指在30—35℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24至48小時(shí)；“生長(zhǎng)（growth）”

2、一詞用于專門的判定，說明“存在和可能存在活的微生物”。準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)(Preparaty(PreparatyTesting)Testing)本章涉及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性取決于：提供的被檢測(cè)樣品本身在實(shí)驗(yàn)條件下，被充分證明不會(huì)抑制可能存在的微生物的生長(zhǎng)。因此，在準(zhǔn)備樣品時(shí)，需要正規(guī)的實(shí)驗(yàn)操作和符合要求的實(shí)驗(yàn)條件，接種稀釋樣品到含有以下（微生物）培養(yǎng)物的培養(yǎng)基：金黃色（奧里斯）葡萄球菌（Staphylococcusaureus）大腸埃希氏菌（

3、Escherichiacoli）銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)和沙門氏菌（Salmonella）。方法如下：將用肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí)后的（微生物）不小于103稀釋的微生物培養(yǎng)物，加1ml（微生物）培養(yǎng)液到磷酸(鹽)緩沖液(pH7.2)，液體大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基（FluidSoybeanCaseinDigestMedium），或者液體乳糖培養(yǎng)基（FluidLactoseMedium）。相應(yīng)培養(yǎng)基培養(yǎng)失敗則需

4、要采取以下方法更改檢測(cè)程序：（1）增加稀釋液體積，檢測(cè)樣品加入量仍維持不變；或者（2）中和一定數(shù)量的干擾因子；或者（3）結(jié)合（1）、（2）得出適當(dāng)條件，使接種物得以生長(zhǎng)。以下是一些物質(zhì)的成分和濃度，該物質(zhì)及濃度可用于加入培養(yǎng)基、阻止物質(zhì)發(fā)揮抑菌作用：大豆卵磷脂（soylecithin0.5%）或者聚山梨醇酯20（polysbate204.0%）。然后重復(fù)前面的實(shí)驗(yàn)，用液體酪蛋白消化物大豆卵磷脂聚山梨醇酯20（FluidCaseinDig

5、estSoylecithinPolysbate20Medium）論證待測(cè)樣品里的防腐劑或其他抑菌因子被中和。若產(chǎn)品中含有抑菌物質(zhì)且產(chǎn)品是可溶性的，則采用“無菌實(shí)驗(yàn)（SterilityTests）”里的“薄膜過濾法(MembraneFiltrationMethod)”進(jìn)行(微生物限度)檢測(cè)會(huì)更適宜（suitable）。在抑菌物質(zhì)得以適當(dāng)中和、稀釋液體積大幅度增加后仍不能排除抑制因子，以及不適宜用“薄膜過濾法”的情況下，可能會(huì)因?yàn)楫a(chǎn)品本身的

6、殺菌作用導(dǎo)致細(xì)菌無法生長(zhǎng)。當(dāng)產(chǎn)品不能檢測(cè)出接種菌種的情況下，應(yīng)用光譜法確定產(chǎn)品的抑菌殺菌成分。緩沖液和培養(yǎng)基緩沖液和培養(yǎng)基(Buffer(BufferSolutionSolutionMedia)Media)按照下列配方配制培養(yǎng)基，或者使用規(guī)范廠商生產(chǎn)的培養(yǎng)基干粉進(jìn)行培養(yǎng)基配制，所使用的干粉培養(yǎng)基應(yīng)該與在此列出的培養(yǎng)基成分比例相似。在按列出的配方進(jìn)行培養(yǎng)基配制時(shí)，用水溶解固體物質(zhì)，必要時(shí)可以加熱以得到完全溶解的均勻溶液。在使用前用鹽酸或氫

7、氧化鈉將培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)到要求范圍，調(diào)節(jié)pH值應(yīng)在252O條件下進(jìn)行。若培養(yǎng)基配方有瓊脂，應(yīng)使用濕度不超過15%的瓊脂。溶解水為純化水（PurifiedWater）。PHPH7.27.2磷酸磷酸(鹽)緩沖液緩沖液儲(chǔ)備液——稱34g磷酸二氫鉀于1000mL容量瓶，加水500mL溶解。用氫氧化鈉TS調(diào)節(jié)pH至7.20.1（約175mL），然后加水至容量瓶刻度，混勻。分裝溶液后滅菌。冰箱保存。36、VogelJohnson瓊脂培養(yǎng)基酪蛋白胰

8、酶消化物10.0g酵母膏5.0g甘露醇10.0g磷酸氫二鉀5.0g（DibasicPotassiumPhosphate）氯化鋰5.0g氨基乙酸（糖膠）10.0g瓊脂16.0g酚紅25.0mg水1000mL溶解后煮沸1分鐘。滅菌，冷卻至45~50℃，然后加20mL滅菌后的亞碲酸鉀（1：100）。滅菌后pH值：7.20.27、溴棕三甲銨瓊脂培養(yǎng)基白明膠胰酶消化物20.0g氯化鎂1.4g硫酸鉀10.0g瓊脂13.6g溴棕三甲銨0.3g丙三醇1

9、0.0mL水1000mL將所有固體溶質(zhì)加入水中，再加入丙三醇，攪拌加熱，煮沸1分鐘得均勻溶液。滅菌后pH值：7.20.28、假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基檢測(cè)熒光生二氫熒光素酪蛋白胰酶消化物10.0g動(dòng)物組織胃蛋白酶消化物10.0g無水磷酸氫二鉀1.5g硫酸鎂（MgSO47H2O）1.5g丙三醇10.0mL瓊脂15.0g水1000mL將所有固體溶質(zhì)加入水中，再加入丙三醇，攪拌加熱，煮沸1分鐘得均勻溶液。滅菌后pH值：7.20.29、假單胞菌瓊脂培養(yǎng)