蛋白質(zhì)定量的五種方法

1、蛋白質(zhì)定量的五種方法蛋白質(zhì)定量的五種方法方法一方法一雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度[目的目的]掌握雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的原理和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。[原理原理]雙縮脲(NH2CONHCONH2)在堿性溶液中與硫酸銅反應(yīng)生成紫紅色化合物，稱為雙縮脲反應(yīng)，蛋白質(zhì)分子中含有許多肽鍵(CONH)在堿性溶液中也能與Cu2反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色化合物。在一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。因此，可以利用比色法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。雙縮脲法是測(cè)定

2、蛋白質(zhì)濃度的常用方法之一。操作簡(jiǎn)便、迅速、受蛋白質(zhì)種類性質(zhì)的影響較小，但靈敏度較差，而且特異性不高。除CONH有此反應(yīng)外，CONH2、CH2NH2、CSNH2等基團(tuán)也有此反應(yīng)。[操作操作]取中試管7支，按下表操作。各管混勻、放置37℃水浴中保溫20分鐘。用540nm比色，以空白管調(diào)零點(diǎn)，讀取各管光密度值。[計(jì)算計(jì)算](一)在座標(biāo)紙上以光密度為縱座標(biāo)，以蛋白質(zhì)濃度為橫座標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(二)從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出待測(cè)血清樣本的蛋白質(zhì)濃度(g／L

3、)，并求出人血清樣本的蛋白質(zhì)濃度。(三)再?gòu)臉?biāo)準(zhǔn)管中選擇一管與測(cè)定管光密度相接近者，求出人血清樣本的蛋白質(zhì)濃度(g／L)。[器材器材]中試管7支，l毫升刻度吸管3支，10毫升刻度吸管1支，水浴箱，721型分光光度計(jì)、坐標(biāo)紙。(一)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以濃度為橫坐標(biāo)，光密度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(二)以測(cè)定管光密度值，查找標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出待測(cè)血清中蛋白質(zhì)濃度(g／L)。(三)再?gòu)臉?biāo)準(zhǔn)管中選擇—管與測(cè)定管光密度相接近者，求出待測(cè)血清中蛋白質(zhì)濃度(

4、g／L)。[器材器材](一)721型分光光度計(jì)()恒溫水浴箱(三)中試管7支(四)刻度吸管：1.0ml二支；0.5ml一支；5.0ml一支。[試劑試劑](一)試劑甲(1)4％碳酸鈉(Na2CO3)溶液(2)0.2N氫氧化鈉溶液(3)1％硫酸銅溶液(CuSO45H2O)(4)2％酒石酸鉀鈉溶液(或酒石酸鉀或鈉)在使用前(1)與(2)、(3)與(4)等體積混合，再將兩混合液按50：1比例混合，即為試劑甲。該試劑只能用一天，過(guò)期失效。(一)試

5、劑乙：(1)市售酚試劑在使用前用NaOH滴定，以酚肽為指標(biāo)劑，根據(jù)試劑酸度將其稀釋，使最后酸度為1N。(2)或取Na2WoO42H2Ol00g和Na2MOO325g。溶于蒸餾水700ml中，再加85％H3PO450ml和HCl(濃)100ml，將上物混合后，置1000ml圓底燒瓶中溫和地回流十小時(shí)，再加硫酸鋰(Li2SO4H2O)150g，水50ml及溴水?dāng)?shù)滴。繼續(xù)沸騰15分鐘后以除去剩余的溴，冷卻后稀釋至1000ml然后過(guò)濾，溶液應(yīng)呈