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文檔簡介
1、ELISAELISA設置陰性、陽性、空白對照涉及實驗結果有效性評價設置陰性、陽性、空白對照涉及實驗結果有效性評價一ELISA試驗有效性與三項對照什么是“有效性”(Validity)?要獲得準確的檢測結果“有效性”評價,就會關系到:為什么要設置“陰性、陽性和空白”等不可缺少的三項對照?要用什么樣的物質擔當“陰性、陽性和空白對照(品)”?這“三項對照”如何設置、需要設置幾個孔位?獲得的測定值如何“認可、取舍與計算”?隨后,又如何依照陽性對照
2、均值(PCx)與陰性對照均值(NCx)的差值(PN,或NP)大小做出“試驗結果有效性”的最終裁決呢?…等等,這一連串的問題,在國外“正規(guī)”品牌的ELISA試劑《使用說明書》中都有明細和詳盡的說明。既有理論要點提示,又有具體細致的舉例解說。很可惜,在90年前后,國內興起ELISA檢測熱潮之際,在一片“國外試劑說明書太詳細、太復雜、不容易看明白、…”等等“一片埋冤”聲中,正好迎合國內商家的“意愿”。從此以后,國產ELISA試劑的說明書,越來
3、越簡單。這其中商家就有兩個“好處”:好處之一,用A4、或B5,甚至比B5還要小的一張紙,代替國際試劑的好幾頁的“使用說明書”(等同于一份“操作手冊”),每年就可節(jié)省一大筆印刷成本費;好處之二,如同國際試劑說明書上向用戶交待的各種表明本試劑質量有關的詳盡內容,國產試劑的所謂“說明書”上統(tǒng)統(tǒng)可以“刪除、回避、拒絕”向用戶通報和承諾。我90年前后收集的雅培、巴斯德、阿克蘇等相關試劑的原文說明書,幾經搬動全都處理,很是可惜。近日,杭州檢疫局朋友
4、送了一份生物梅里埃中國有限公司的中文版《人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)使用說明書》。對照閱讀之下,深深感到這才是一份真正意義上的《使用說明書》呀!在我下文提到的若干“概念、問題”,從中都可以找到答案。我現在參照我本人1993年的《肝炎ELISA試劑質量與檢測結果有效性評價》會議講稿相關內容,就“三項對照與檢測結果有效性”表示如下認識和討論。二三項對照要求與用途ELISA檢測,按照試劑說明書要求,每次試驗、每塊扳上都要設
5、置以下3項對照和用途:5ZJ8Yh1空白對照:僅用稀釋液代替檢測樣本、用以觀測最終反應的顯色“本底”、并用于酶標儀消除、扣除“本底”,即:以本底為“零”讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值(A);或者,在計算陰性對照均值(NCx)、陽性對照均值(PCx)、樣本讀數的SC.O.值時減去空白對照的本底吸光值。早年的酶標儀無自動扣除空白對照孔讀數功能,這種酶標議現已淘汰不用了,寫上這段話的意思是補充說明設置空白對照的用途??瞻卓拙唧w如何讀
6、取讀數,則依照說明書操作。例如,生物梅里埃中國有限公司的中文版《人類免疫缺陷病毒過數種試驗進行“篩試”、把含有“干擾性物質”的血清剔除、不用,以避免出現“假陽性”干擾試驗結果。km0R)i(2)陽性對照(品)設置,也可區(qū)分為兩種類型與用途:P|Cp)8一是陽性對照主要用于評價該項試驗結果是否有效和試驗結果的穩(wěn)定性與可比性。而所設的陽性對照的測量值不列入Cutoff值計算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。Z%)`0R
7、j二是陽性對照的設置,不僅用于評價試驗結果是否有效和試驗結果的穩(wěn)定性與可比性,而且計入Cutoff的計算。此時的Cutoff值的含義是代表該標志物在健康(正常)人群中正常值范圍的上限。待檢樣本檢測值超過該上限(Cutoff)時表示有診斷意義。例如抗—HBe、抗—HBc、抗—HBcIgM等。)Wm:t三陰性與陽性對照平均值計算與判斷fys!c1陰性對照平均值NCx有效性計算判斷舉例:A3a[1](1)第一類NCx計算與評價:以HBsAg為
8、例45dgB巴斯德HBsAgEIAKit。(2)第二類NCx計算與評價:可包括抗—HBc、抗—HBe。以抗—HBc、抗—HBe為例::=Jj=ZⅠ.取3孔陰性對照A值的平均值:Ke(@Tq抗—HBcNCx=(1.0270.9891.278)3=1.065zf#v5=$抗—HBeNCx=(1.1691.0880.993)3=1.083;%rCGTS4D請各位注意:這2個NCx是不是很接近1.00呀?也就是說,十分接近C.O.I.(C.O.
9、S,或C.O.A)=1.00!這不是一種偶然,而是國際試劑(如雅培)的“質量”標志。如果偏大,例如1.50以上,或者偏小,0.50以下,待檢樣本中會導致出現什么現象呢?請讀者自己思考吧。sjpIⅡ.各孔NC值均應<2.000,并處于≥0.5NCx至≤1.5NCx之間。若其中1孔NC值偏離該范圍時,棄去,再計算2孔的NC值的NCx。如有2孔NC值偏離該范圍時,應重新試驗。2陽性對照平均值PCx有效性計算與評價也分為兩類:!eb`D5(1)
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