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1、1高中生物選修三《現(xiàn)代生物科技專題》課后題答案和提示高中生物選修三《現(xiàn)代生物科技專題》課后題答案和提示專題一專題一基因工程基因工程1.11.1DNADNA重組技術(shù)的基本工具重組技術(shù)的基本工具(一)思考與探究(一)思考與探究1.1.限制酶在限制酶在DNADNA的任何部位都能將的任何部位都能將DNADNA切開嗎?以下是四種不同限制酶切割形成的切開嗎?以下是四種不同限制酶切割形成的DNADNA片段:片段:(1)(1)…CTGCACTGCA(2
2、)(2)…ACAC(3)(3)GCGC……G…TGTGCGCG…(4)…G(5)(5)G…(6)(6)…GCGC…CTTAACTTAAACGTCACGTC……CGCG(7)(7)GTGT…(8)AATTC(8)AATTC…CACA…G…你是否能用你是否能用DNADNA連接酶將它們連接起來?連接酶將它們連接起來?答:答:2和7能連接形成…能連接形成…ACGTACGT……TGCATGCA…;…;4和8能連接形成…能連接形成…GAATTCGA
3、ATTC……CTTAAGCTTAAG…;…;3和6能連接形成…能連接形成…GCGCGCGC……CGCGCGCG…;…;1和5能連接形成…能連接形成…CTGCAGCTGCAG……GACGTCGACGTC…。…。2.2.聯(lián)系你已有的知識,想一想,為什么細(xì)菌中限制酶不剪切細(xì)菌本身的聯(lián)系你已有的知識,想一想,為什么細(xì)菌中限制酶不剪切細(xì)菌本身的DNADNA?提示:迄今為止,基因工程中使用的限制酶絕大部分都是從細(xì)菌或霉菌中提取出來的,它們各自可以提
4、示:迄今為止,基因工程中使用的限制酶絕大部分都是從細(xì)菌或霉菌中提取出來的,它們各自可以識別和切斷識別和切斷DNADNA上特定的堿基序列。細(xì)菌中限制酶之所以不切斷自身上特定的堿基序列。細(xì)菌中限制酶之所以不切斷自身DNADNA,是因?yàn)槲⑸镌陂L期的進(jìn)化過,是因?yàn)槲⑸镌陂L期的進(jìn)化過程中形成了一套完善的防御機(jī)制,對于外源入侵的程中形成了一套完善的防御機(jī)制,對于外源入侵的DNADNA可以降解掉。生物在長期演化過程中,含有某種限可以降解掉。生物在
5、長期演化過程中,含有某種限制酶的細(xì)胞,其制酶的細(xì)胞,其DNADNA分子中或者不具備這種限制酶的識別切割序列,或者通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識分子中或者不具備這種限制酶的識別切割序列,或者通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識別序列的堿基上,使限制酶不能將其切開。這樣,盡管細(xì)菌中含有某種限制酶也不會使自身的別序列的堿基上,使限制酶不能將其切開。這樣,盡管細(xì)菌中含有某種限制酶也不會使自身的DNADNA被切被切斷,并且可以防止外源斷,并且可以防止外源D
6、NADNA的入侵。的入侵。3.3.天然的天然的DNADNA分子可以直接用做基因工程載體嗎?為什么?分子可以直接用做基因工程載體嗎?為什么?提示:基因工程中作為載體使用的提示:基因工程中作為載體使用的DNADNA分子很多都是質(zhì)粒(分子很多都是質(zhì)粒(plasplas),即獨(dú)立于細(xì)菌擬核處染色體,即獨(dú)立于細(xì)菌擬核處染色體DNADNA之外的一種可以自我復(fù)制、雙鏈閉環(huán)的裸露的之外的一種可以自我復(fù)制、雙鏈閉環(huán)的裸露的DNADNA分子。是否任何質(zhì)粒都
7、可以作為基因工程載體使用分子。是否任何質(zhì)粒都可以作為基因工程載體使用呢?其實(shí)不然,作為基因工程使用的載體必需滿足以下條件。呢?其實(shí)不然,作為基因工程使用的載體必需滿足以下條件。(1)載體載體DNADNA必需有一個或多個限制酶的切割位點(diǎn),以便目的基因可以插入到載體上去。這些供目的基必需有一個或多個限制酶的切割位點(diǎn),以便目的基因可以插入到載體上去。這些供目的基因插入的限制酶的切點(diǎn)所處的位置,還必須是在質(zhì)粒本身需要的基因片段之外,這樣才不至于
8、因目的基因因插入的限制酶的切點(diǎn)所處的位置,還必須是在質(zhì)粒本身需要的基因片段之外,這樣才不至于因目的基因的插入而失活。的插入而失活。(2)載體載體DNADNA必需具備自我復(fù)制的能力,或整合到受體染色體必需具備自我復(fù)制的能力,或整合到受體染色體DNADNA上隨染色體上隨染色體DNADNA的復(fù)制而同步復(fù)制。的復(fù)制而同步復(fù)制。(3)載體載體DNADNA必需帶有標(biāo)記基因,以便重組后進(jìn)行重組子的篩選。必需帶有標(biāo)記基因,以便重組后進(jìn)行重組子的篩選。(
9、4)載體載體DNADNA必需是安全的,不會對受體細(xì)胞有害,或不能進(jìn)入到除受體細(xì)胞外的其他生物細(xì)胞中去。必需是安全的,不會對受體細(xì)胞有害,或不能進(jìn)入到除受體細(xì)胞外的其他生物細(xì)胞中去。(5)載體載體DNADNA分子大小應(yīng)適合,以便提取和在體外進(jìn)行操作,太大就不便操作。分子大小應(yīng)適合,以便提取和在體外進(jìn)行操作,太大就不便操作。實(shí)際上自然存在的質(zhì)粒實(shí)際上自然存在的質(zhì)粒DNADNA分子并不完全具備上述條件,都要進(jìn)行人工改造后才能用于基因工程操作。
10、分子并不完全具備上述條件,都要進(jìn)行人工改造后才能用于基因工程操作。4.4.網(wǎng)上查詢:網(wǎng)上查詢:DNADNA連接酶有連接單鏈連接酶有連接單鏈DNADNA的本領(lǐng)嗎?的本領(lǐng)嗎?提示:迄今為止,所發(fā)現(xiàn)的提示:迄今為止,所發(fā)現(xiàn)的DNADNA連接酶都不具有連接單鏈連接酶都不具有連接單鏈DNADNA的能力,至于原因,現(xiàn)在還不清楚,也的能力,至于原因,現(xiàn)在還不清楚,也許將來會發(fā)現(xiàn)可以連接單鏈許將來會發(fā)現(xiàn)可以連接單鏈DNADNA的酶。的酶。3根瘤農(nóng)桿菌侵
11、染植物是一個非常復(fù)雜的過程。根瘤農(nóng)桿菌具有趨化性,即植物的受傷組織會產(chǎn)生一些根瘤農(nóng)桿菌侵染植物是一個非常復(fù)雜的過程。根瘤農(nóng)桿菌具有趨化性,即植物的受傷組織會產(chǎn)生一些糖類和酚類物質(zhì)吸引根瘤農(nóng)桿菌向受傷組織集中。研究證明,主要酚類誘導(dǎo)物為乙酰丁香酮和羧基乙酰丁糖類和酚類物質(zhì)吸引根瘤農(nóng)桿菌向受傷組織集中。研究證明,主要酚類誘導(dǎo)物為乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮,這些物質(zhì)主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合成,通常不存在于單子葉植物中,這也是單子葉植物不易被
12、香酮,這些物質(zhì)主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合成,通常不存在于單子葉植物中,這也是單子葉植物不易被根瘤農(nóng)桿菌侵染的原因。近年來還發(fā)現(xiàn)一些中性糖,如根瘤農(nóng)桿菌侵染的原因。近年來還發(fā)現(xiàn)一些中性糖,如LL阿拉伯糖、阿拉伯糖、DD木糖等也有誘導(dǎo)作用。酚類物質(zhì)和木糖等也有誘導(dǎo)作用。酚類物質(zhì)和糖類物質(zhì)既可以作為根瘤農(nóng)桿菌的趨化物,又可以作為農(nóng)桿菌中糖類物質(zhì)既可以作為根瘤農(nóng)桿菌的趨化物,又可以作為農(nóng)桿菌中TiTi質(zhì)粒上質(zhì)粒上VirVir區(qū)(毒性區(qū))基因的誘
13、導(dǎo)區(qū)(毒性區(qū))基因的誘導(dǎo)物,使物,使VirVir區(qū)基因活化,導(dǎo)致區(qū)基因活化,導(dǎo)致TDNATDNA的加工和轉(zhuǎn)移,從而侵染植物細(xì)胞。的加工和轉(zhuǎn)移,從而侵染植物細(xì)胞。需要注意的是農(nóng)桿菌中不同的菌株,侵染能力有差別,在基因工程中需要加以選擇使用。利用農(nóng)桿菌需要注意的是農(nóng)桿菌中不同的菌株,侵染能力有差別,在基因工程中需要加以選擇使用。利用農(nóng)桿菌侵染單子葉植物進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化時,是需要加上述酚類物質(zhì)的,同時單子葉植物種類不同,農(nóng)桿菌侵染進(jìn)行侵染單子葉植
14、物進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化時,是需要加上述酚類物質(zhì)的,同時單子葉植物種類不同,農(nóng)桿菌侵染進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的效果也有很大差異。遺傳轉(zhuǎn)化的效果也有很大差異。如果想將一個抗病毒基因轉(zhuǎn)入小麥,也可以用農(nóng)桿菌,但要注意兩點(diǎn):①要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株,如果想將一個抗病毒基因轉(zhuǎn)入小麥,也可以用農(nóng)桿菌,但要注意兩點(diǎn):①要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株,因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌菌株都可以侵染單子葉植物;②要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì),一般為乙酰丁香酮等,目因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌菌株都可以侵染單
15、子葉植物;②要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì),一般為乙酰丁香酮等,目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏(趨化性)和激活農(nóng)桿菌的的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏(趨化性)和激活農(nóng)桿菌的VirVir區(qū)(誘導(dǎo))的基因,使區(qū)(誘導(dǎo))的基因,使TDNATDNA轉(zhuǎn)移并插入到染色體移并插入到染色體DNADNA上。上。3.3.利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素,聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識,結(jié)合基因工程操作程序的基本利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素,聯(lián)系前面有
16、關(guān)細(xì)胞器功能的知識,結(jié)合基因工程操作程序的基本思路,思考一下,若要生產(chǎn)人的糖蛋白,可以用大腸桿菌嗎?思路,思考一下,若要生產(chǎn)人的糖蛋白,可以用大腸桿菌嗎?提示:有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈,這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的,內(nèi)提示:有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈,這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中,大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器,因此,在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體
17、存在于真核細(xì)胞中,大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器,因此,在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。蛋白是不可能的。4.4.β珠蛋白是動物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異常時,動物有可能患某種疾病,如鐮刀形細(xì)珠蛋白是動物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異常時,動物有可能患某種疾病,如鐮刀形細(xì)胞貧血癥。假如讓你用基因工程的方法,使大腸桿菌生產(chǎn)出鼠的β胞貧血癥。假如讓你用基因工程的方法,使大腸桿菌生產(chǎn)出鼠的β珠蛋白,想一想,應(yīng)如何進(jìn)行設(shè)計(jì)?珠蛋
18、白,想一想,應(yīng)如何進(jìn)行設(shè)計(jì)?提示:基本操作如下:提示:基本操作如下:(1)從小鼠中克隆出β)從小鼠中克隆出β珠蛋白基因的編碼序列(珠蛋白基因的編碼序列(cDNAcDNA)。(2)將)將cDNAcDNA前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動子,另外加上抗四環(huán)素的基因,構(gòu)建成一個表達(dá)載體。前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動子,另外加上抗四環(huán)素的基因,構(gòu)建成一個表達(dá)載體。(3)將表達(dá)載體導(dǎo)入無四環(huán)素抗性的大腸桿菌中,然后在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸
19、桿菌。如果表)將表達(dá)載體導(dǎo)入無四環(huán)素抗性的大腸桿菌中,然后在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌。如果表達(dá)載體未進(jìn)入大腸桿菌中,大腸桿菌會因不含有抗四環(huán)素基因而死掉;如果培養(yǎng)基上長出大腸桿菌菌落,達(dá)載體未進(jìn)入大腸桿菌中,大腸桿菌會因不含有抗四環(huán)素基因而死掉;如果培養(yǎng)基上長出大腸桿菌菌落,則表明β則表明β珠蛋白基因已進(jìn)入其中。珠蛋白基因已進(jìn)入其中。(4)培養(yǎng)進(jìn)入了β)培養(yǎng)進(jìn)入了β珠蛋白基因的大腸桿菌,收集菌體,破碎后從中提取β珠蛋白基因的大腸
20、桿菌,收集菌體,破碎后從中提取β珠蛋白。珠蛋白。(二)求異思維(二)求異思維你能推測出由你能推測出由mRNAmRNA反轉(zhuǎn)錄形成反轉(zhuǎn)錄形成cDNAcDNA的過程大致分為哪些步驟嗎?的過程大致分為哪些步驟嗎?提示:提示:19701970年,特明(年,特明(H.M.H.M.TeminTemin)和巴爾的摩()和巴爾的摩(D.D.BaltimeBaltime)證實(shí)了)證實(shí)了RNARNA病毒中含有一種能將病毒中含有一種能將RNARNA轉(zhuǎn)錄成轉(zhuǎn)錄成
21、DNADNA的酶,這種酶被稱為依賴的酶,這種酶被稱為依賴RNARNA的DNADNA聚合酶,由于與中心法則中的從聚合酶,由于與中心法則中的從DNADNA到RNARNA的轉(zhuǎn)錄是的轉(zhuǎn)錄是反向的,所以稱為反轉(zhuǎn)錄酶(反向的,所以稱為反轉(zhuǎn)錄酶(reversereversetranasetranase)。反轉(zhuǎn)錄酶既可以利用反轉(zhuǎn)錄酶既可以利用DNADNA又可以利用又可以利用RNARNA作為模板合成與之互補(bǔ)的作為模板合成與之互補(bǔ)的DNADNA鏈。像其他鏈
22、。像其他DNADNA聚合酶一樣,反轉(zhuǎn)聚合酶一樣,反轉(zhuǎn)錄酶也以錄酶也以5′→′→3′方向合成′方向合成DNADNA(圖(圖1313)。圖1313由mRNAmRNA反轉(zhuǎn)錄形成反轉(zhuǎn)錄形成cDNAcDNA的過程的過程cDNAcDNA合成過程是:第一步,反轉(zhuǎn)錄酶以合成過程是:第一步,反轉(zhuǎn)錄酶以RNARNA為模板合成一條與為模板合成一條與RNARNA互補(bǔ)的互補(bǔ)的DNADNA單鏈,形成單鏈,形成RNADNARNADNA雜交分子。第二步,核酸酶交分子。
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