藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課.

1、藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課,藥理教研室,,實(shí)驗(yàn)課程簡介,（1）實(shí)驗(yàn)基本技能,（2）嗎啡鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn),（5）藥物對家兔尿量的影響,（6）傳出神經(jīng)藥物對家兔血壓的影響,（4）藥物對家兔離體腸平滑肌的作用,（3）藥物抗炎實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)課程學(xué)習(xí)要求,實(shí)驗(yàn)課程學(xué)習(xí)目的,基本實(shí)驗(yàn)操作,不同給藥途徑的藥物對小鼠睡眠時間的影響,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn),一、,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）掌握小鼠給藥的基本方法。2）比較不同給藥途徑藥物起效的時間快慢。實(shí)驗(yàn)原理：不同的給藥途徑的藥物起效時間不相同。

2、,,,,,1,實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?實(shí)驗(yàn)動物：小鼠實(shí)驗(yàn)藥物：1%戊巴比妥鈉,2,主要實(shí)驗(yàn)材料,稱重、分組,,,,,,腹腔給藥,皮下給藥,灌胃給藥,（0.1ml/10g）,小鼠翻正反射消失時翻正反射再次恢復(fù)時間,主要實(shí)驗(yàn)過程,實(shí)驗(yàn)基本技能,右手提起鼠尾, 左手拇指和食指捏住雙耳及頭部皮膚，無名指、小指和掌心夾其背部皮膚及尾部,便可將小鼠完全固定。如圖-1。單手捉持，用拇指和食指抓住小鼠尾巴，用小指、無名指和手掌壓住尾根

3、部，再用騰出的拇指、食指及中指抓住鼠雙耳及頭部皮膚而固定 。如圖-2。,圖1 圖2,注意事項(xiàng)：,小鼠固定方法,注意事項(xiàng)：1. 取背部及后腿皮下，注射時用左手拇指及食指輕輕捏起皮膚，右手持注射器將針頭刺入，固定后即進(jìn)行注射。,皮下注射,注意事項(xiàng)： 1、針頭刺入部位不宜太接近上腹部或太深，以免刺破內(nèi)臟。針頭與腹腔的角度不宜太小，避免刺入皮下。 2、使用針頭不宜

4、太粗，避免藥液注射后從注射孔流出。注射后可用棉球按一下注射部位。,腹腔注射,注意事項(xiàng)：1.用左手拇指和食指抓住鼠兩耳和頭部皮膚，其他三指抓住背部皮膚，將鼠抓持在手掌內(nèi)，固定好動物，頭部和頸部保持很平,右手取注射器進(jìn)行灌胃。2.灌時針頭沿鼠口角通過食管進(jìn)入胃內(nèi)。灌時如很通暢，則表示針頭已進(jìn)入胃內(nèi)；如動物有嘔吐動物或強(qiáng)烈掙扎，必須拔出后按上述方法重新操作。決不可進(jìn)針不順硬向里插。,灌胃給藥,（1）注意基本給藥途徑的正確操作。 （2

5、）注意小鼠翻正反射消失時間判定 （＞1min）。 （3）客觀真實(shí)的記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。,4,實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng),,,,,仔細(xì)觀察記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合藥理學(xué)總論知識思考，何種給藥途徑起效最快。為什么？,問題與思考,嗎啡鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn),藥理學(xué)實(shí)驗(yàn),二、,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?①掌握鎮(zhèn)痛藥的實(shí)驗(yàn)方法。（熱板法、扭體法）②觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用。實(shí)驗(yàn)原理：熱刺激或者化學(xué)刺激物使小鼠 產(chǎn)生疼痛反應(yīng)

6、，觀察給藥前后小鼠疼痛反應(yīng)的變化。（痛閾值、扭體次數(shù)）,1,實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?實(shí)驗(yàn)動物：小鼠（雌性） 實(shí)驗(yàn)藥物： 0.4%嗎啡 主要儀器：熱板測痛儀（RB-200智能熱板儀）,2,主要實(shí)驗(yàn)材料,設(shè)定儀器溫度（55℃）,動物初篩,,,,,,,給藥組： 0.4%嗎啡0.1ml/10g,給藥組：生理鹽水0.1ml/10g,腹腔注射,,,,給藥后30min、45min、60min再次測定各組小鼠痛閾值。,主要實(shí)驗(yàn)過程（熱板法）,篩選指標(biāo)：

7、小鼠的痛閾值——即小鼠出現(xiàn)疼痛反應(yīng)的時間。 以小鼠添后足作為出現(xiàn)疼痛觀察指標(biāo)。 測定2次痛閾值，以痛閾值大于5秒，小于30秒，做為篩選合格動物。,,小鼠篩選方法：,動物隨即分組,,,,,,給藥組： 0.4%嗎啡0.1ml/10g,腹腔注射,,,,30min后各組小鼠均注射0.6%冰醋酸（0.2ml/只）；記錄15min內(nèi)各組小鼠的扭體次數(shù)。,對照組： 生理鹽水0.1ml/10g,,小鼠扭體反應(yīng),主要實(shí)驗(yàn)過程（扭體法）,熱

8、板儀溫度設(shè)定：55℃±0.5 ℃。室溫 :以15 ～20ºC為宜 。熱板法中動物性別的選擇：雌性。痛閾值判定指標(biāo)：添后足。痛閾值時間：初篩（＞5s、＜30s）。 超過60s動物未添足，將動物取出，痛閾值以60s計(jì)算。實(shí)驗(yàn)中保持小鼠足底及熱板內(nèi)干燥。冰醋酸現(xiàn)用現(xiàn)配。,4,實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng),,,,問題與思考,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn),抗炎實(shí)驗(yàn),三、,1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)利用化學(xué)藥物或者雞蛋清制急性炎癥動物 模型方法。

9、 觀察糖皮質(zhì)激素的抗炎作用。1.2 實(shí)驗(yàn)原理：化學(xué)刺激物或者蛋清，可致動物急性炎癥，出現(xiàn)局部腫脹。比較給予藥物前后動物局部腫脹程度的變化從而觀察到藥物的抗炎作用。,1,實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?實(shí)驗(yàn)動物：小鼠、大鼠（雄性） 實(shí)驗(yàn)藥物：氫化可的松 主要儀器（PV-200足趾腫脹測定儀）,主要實(shí)驗(yàn)材料,動物稱重、分組,踝關(guān)節(jié)的突起點(diǎn)標(biāo)記，作為測量標(biāo)志（見后圖）,,,,,,,給藥組：氫化可的松溶液1ml/100g 體重,對照組：生理鹽水

10、1ml/100g 體重,腹腔注射,,,,30min， 從右后足掌心向掌跖關(guān)節(jié)方向進(jìn)針，皮下注射新鮮蛋清0.1ml。 (見后圖)注射蛋清后30min、60 min、90min，測量右后足的體積，,3,實(shí)驗(yàn)主要步驟（大鼠足腫脹）,皮下注射新鮮蛋清,大鼠足外踝標(biāo)記,實(shí)驗(yàn)照片,小鼠稱重、標(biāo)記、分組,,,,給藥組：氫化可的松0.1ml/10g,腹腔注射,,30min后用二甲苯50μl均勻涂抹每只鼠的右耳,對照組： 生理鹽水0.1ml/10g

11、,,,,,,,90mim后小鼠脫臼處死，分別用打孔器取相同部位左右耳片，電子天平稱重。,主要實(shí)驗(yàn)步驟（小鼠耳腫脹）,抗炎實(shí)驗(yàn)中動物性別的選擇：雄性。測定大鼠足體積時，選定統(tǒng)一測量位置（大鼠足外踝關(guān)節(jié)突起）。小鼠耳廓滴加二甲苯時，正反面均勻涂抹。避免滴入耳廓內(nèi)。小鼠左右耳打耳片位置統(tǒng)一（耳廓中間部位）。,4,實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng),,,,本實(shí)驗(yàn)中選擇雄性動物的原因？,問題與思考,常見炎癥模型介紹,,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn),藥物對家兔離體腸平滑肌的作用,四

12、、,1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)離體平滑肌器官的實(shí)驗(yàn)方法。 觀察擬膽堿藥和抗膽堿藥對離體家兔腸平滑肌的作用。1.2 實(shí)驗(yàn)原理：乙酰膽堿通過激動M受體興奮胃腸平滑肌；阿托平可阻斷M受體；氯化鋇直接興奮胃腸平滑肌。,1,實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?主要實(shí)驗(yàn)材料,實(shí)驗(yàn)動物：家兔 實(shí)驗(yàn)藥物：乙酰膽堿溶液（1:10萬）、0.1% 硫酸阿托品溶液、1% 氯化鋇溶液 主要儀器：離體平滑肌槽、生物機(jī)能系統(tǒng),3,取回腸置冷臺氏液中,制備

13、離體腸肌,,,家兔處死,實(shí)驗(yàn)主要步驟1,3,在浴槽（大試管）中，加入臺氏液至標(biāo)線處，加熱，維持水溫38°C±0.5°C。,實(shí)驗(yàn)主要步驟2,3,取回腸，固定于平滑肌槽內(nèi),調(diào)整懸掛絲線松勁程度調(diào)節(jié)通氣閥每秒鐘1-2個氣泡,點(diǎn)擊桌面中BL-420圖標(biāo)，進(jìn)入主菜單,,,實(shí)驗(yàn)主要步驟3,實(shí)驗(yàn)主要步驟4,,,,,,,,,正常曲線,乙酰膽堿,阿托品,乙酰膽堿,1. 腸管穩(wěn)定10分鐘，記錄一段正?；顒忧?/p>

14、線 。,2. 加入1:10萬乙酰膽堿溶0.2ml，記錄其收縮幅度,3. 收縮到最高點(diǎn)時，立即加入0.1% 硫酸阿托0.1ml。觀察結(jié)果。,4. 平滑肌收縮穩(wěn)定后，再加入1:10萬乙酰膽堿溶液，相比較，觀察結(jié)果有何不同。,3,實(shí)驗(yàn)主要步驟5,,,,,Bacl2,乙酰膽堿,加入1% 氯化鋇溶液1ml,待作用至最高點(diǎn)時，加入0.1% 硫酸阿托品溶液0.1ml，再次觀察結(jié)果。,3,沖洗和分離腸管時動作應(yīng)輕柔，盡量避免牽拉腸管。 腸管穿線

15、時，對角線穿過腸壁，只需穿過一層腸壁。臺氏液應(yīng)保持在38±0.5°C，換液時，臺氏液亦應(yīng)38±0.5°C。加藥時不要把藥液直接加到回腸上，以免影響結(jié)果。 浴溫和腸肌的張力均可影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)注意調(diào)節(jié)。,4,實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng),,,,實(shí)驗(yàn)中能影響離體腸肌收縮活性的必要條件有哪些？,問題與思考,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn),四、,,藥物的利尿作用,1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)利尿的實(shí)驗(yàn)方法. 觀察利尿藥對尿量的影響

16、。1.2 實(shí)驗(yàn)原理：呋噻米屬高效利尿藥，通過抑制髓袢升枝粗段對氯化鈉的重吸收而達(dá)到利尿作用 。,1,實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?主要實(shí)驗(yàn)材料,實(shí)驗(yàn)動物：雄性家兔，體重2— 3kg 實(shí)驗(yàn)藥物： 3%戊巴比妥鈉、1%呋噻米、主要儀器：燒杯、膀胱漏斗、10 ml量筒。,1、 取家兔1只，稱重，清水灌胃30ml/kg,3,實(shí)驗(yàn)主要步驟1,2、30min后，用3%戊巴比妥鈉1 ml/kg經(jīng)耳緣靜脈注射麻醉,實(shí)驗(yàn)主要步驟2,3、家兔背位固定于兔臺上。

17、恥骨聯(lián)合前正中切開腹部皮膚4～6 cm，暴露膀胱。,實(shí)驗(yàn)主要步驟3,4、分離輸尿管，結(jié)扎尿道內(nèi)口。在膀胱游離部作荷包縫合，然后剪開小口插入膀胱漏斗并固定。,實(shí)驗(yàn)主要步驟4,5、記錄10分鐘正常尿量；耳緣靜脈注入呋噻米0.5ml/kg，觀察并記錄各藥給藥后10 min尿液滴數(shù)及尿量。,實(shí)驗(yàn)主要步驟5,家兔麻醉過程中，控制麻醉藥推注速度，密切觀察實(shí)驗(yàn)過程中家兔情況。手術(shù)過程中，動作輕柔，以免損傷膀胱。準(zhǔn)確找到輸尿管，注意輸尿管的生理比鄰

18、位置。,4,實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng),,,,呋塞米強(qiáng)大利尿作用的原因是什么？,問題與思考,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn),傳出神經(jīng)系統(tǒng)藥物對家兔動脈血壓的影響,五、,1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)麻醉動物急性血壓實(shí)驗(yàn)的方法 。 觀察傳出神經(jīng)藥物對動物血壓的影響 。1.2 實(shí)驗(yàn)原理：鹽酸腎上腺素溶液 、酚妥拉明溶液等藥物能與心肌或者血管平滑肌上的相應(yīng)受體結(jié)合，從而影響家兔的血壓。,1,實(shí)驗(yàn)?zāi)康募霸?主要實(shí)驗(yàn)材料1,實(shí)驗(yàn)動物：家兔 實(shí)驗(yàn)藥物：3%戊巴比妥鈉溶液、0.

19、001%腎上腺素溶液、 0.001%去甲腎上腺素溶液、 0.001%異丙腎上腺素溶液、酚妥拉明（1%溶液） 、普萘洛爾（ 0.01%溶液）、乙酰膽堿（0.001%溶液） 、阿托品（0.01%溶液）.,主要實(shí)驗(yàn)材料2,主要儀器：壓力換能器、BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、手術(shù)刀、手術(shù)剪、止血鉗、氣管插管、動脈插管、動脈夾、頭皮靜脈注射針頭等。,3,稱重、麻醉、固定腹腔注射3%戊巴比妥鈉1ml/kg,耳緣靜脈，建立靜脈輸液通道,頸正中切口，

20、分離氣管；插入氣管插管,,,實(shí)驗(yàn)主要步驟１,實(shí)驗(yàn)照片,分離氣管,氣管插管,3,分離得到頸總動脈,頸總動脈插管,氣管一側(cè)的頸動脈鞘內(nèi)分離頸總動脈，進(jìn)行頸總動脈插管,實(shí)驗(yàn)主要步驟２,3,連接壓力換能器后，打開電腦，點(diǎn)擊桌面上的BL-420圖標(biāo)，進(jìn)入血壓實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。,實(shí)驗(yàn)主要步驟３,異丙腎上腺素（0.1ml/kg） 普萘洛爾（0.2ml/kg）異丙腎上腺素（0.1ml/kg）,腎上腺素（0.1ml/kg）去甲腎上腺素（0.

21、1ml/kg） 酚妥拉明（0.1ml/kg) 腎上腺素（0.1ml/kg）,乙酰膽堿 （0.1ml/kg） 阿托品 （0.1ml/kg） 乙酰膽堿 （0.1ml/kg）,,,,,,,,,,,,,,,,,,作用于α、β受體的藥物,作用于β受體的藥物,作用于M受體的藥物,3,實(shí)驗(yàn)主要步驟４,靜脈插管過程容易發(fā)生出血，操作應(yīng)仔細(xì)、小心。 每次給藥后，都要輸入3ml生理鹽水，將藥物完全沖入血管內(nèi)。