藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)基本技能

1、藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)基本知識(shí),藥理教研室,實(shí)驗(yàn)要求（一）實(shí)驗(yàn)課前1、仔細(xì)閱讀實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，了解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、要求、步驟及注意事項(xiàng)。2、復(fù)習(xí)相關(guān)理論知識(shí)，充分理解實(shí)驗(yàn)的原理和意義。3、預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，寫好預(yù)習(xí)報(bào)告。,（二）實(shí)驗(yàn)課中1、穿白大褂，帶學(xué)生證領(lǐng)實(shí)驗(yàn)器材、藥品。2、分工合作，積極參與實(shí)驗(yàn)操作、觀察、記錄。3、節(jié)約試劑和藥品，愛(ài)護(hù)實(shí)驗(yàn)器材，如出現(xiàn)故障，及時(shí)請(qǐng)示老師。4、嚴(yán)格控制時(shí)間，保證在規(guī)定的課時(shí)內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)任務(wù)。,（三）實(shí)驗(yàn)課后

2、1、清洗，整理實(shí)驗(yàn)用品。2、值日3、整理實(shí)驗(yàn)記錄，寫好實(shí)驗(yàn)報(bào)告。,藥理實(shí)驗(yàn)學(xué)的基本原理,為了解生命的某些規(guī)律,必須設(shè)計(jì)并進(jìn)行特定的實(shí)驗(yàn)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析總結(jié),從而作出正確的判斷。 可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)的三個(gè)基本要素是（1）符合條件的動(dòng)物或標(biāo)本（實(shí)驗(yàn)對(duì)象）（2）作用于實(shí)驗(yàn)對(duì)象的某些實(shí)驗(yàn)條件（實(shí)驗(yàn)因素）（3）實(shí)驗(yàn)對(duì)象的某些生命活動(dòng)的變化（實(shí)驗(yàn)效應(yīng)或指標(biāo)）,實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫,1、實(shí)驗(yàn)名稱2、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4、實(shí)驗(yàn)步驟

3、5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果6、討論、結(jié)論,常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的定義 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（laboratory animal）是根據(jù)科學(xué)研究需要在實(shí)驗(yàn)室條件下有目的、有計(jì)劃進(jìn)行人工馴養(yǎng)，繁殖和科學(xué)培育而獲得的動(dòng)物。 如,轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,二、實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物 泛指一切用于實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物，這是一個(gè)廣義的概念，其中包括要求嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，還包括家畜、野生動(dòng)物和觀賞動(dòng)物等。,常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的特點(diǎn)及應(yīng)用,一、青蛙和蟾蜍（frog v hoptoad

4、）,（一）生物學(xué)特性 兩棲類變溫動(dòng)物，有兩個(gè)心房、一個(gè)心室，房室區(qū)分不明顯。蟾蜍背部有許多突起毒腺，分泌毒素。 （二）在生物科學(xué)研究中的應(yīng)用 1.藥物對(duì)心臟的灌流實(shí)驗(yàn)。 2.藥物對(duì)神經(jīng)、肌肉、神經(jīng)-肌接頭的影響。常用于： 蛙心灌流 坐骨神經(jīng)-腓腸肌標(biāo)本 坐骨神經(jīng)-縫匠肌標(biāo)本,不同灌流液對(duì)心肌收縮的

5、影響,二、實(shí)驗(yàn)小鼠(mice),（一）生物學(xué)特性,一般特性： 1.對(duì)外界環(huán)境反應(yīng)敏感，適應(yīng)性差，強(qiáng)光或噪聲刺激時(shí)，可能導(dǎo)致哺乳母鼠神經(jīng)紊亂，發(fā)生食仔現(xiàn)象。溫度過(guò)高或過(guò)低時(shí)，生殖能力下降，嚴(yán)重時(shí)會(huì)發(fā)生死亡；2.對(duì)多種毒素和病原體易感，百萬(wàn)分之一的破傷風(fēng)毒素能使小鼠死亡；3.對(duì)致癌物敏感，自發(fā)性腫瘤多。,(二)生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用1、藥物學(xué)研究和毒性試驗(yàn)(1)藥物篩選試驗(yàn):小鼠常用于藥物對(duì)疾病療效篩選試驗(yàn),如抗腫瘤藥物,抗結(jié)核藥物,

6、抗瘧疾藥物等的篩選。(2)藥效及其副作用研究:如：利用聲源性驚厥小鼠來(lái)評(píng)價(jià)抗痙攣藥物:利用小鼠角膜和耳廓反射評(píng)價(jià)鎮(zhèn)定藥物。,(3)毒性試驗(yàn)和安全分析,如：用于鉛、苯、汞、矽、一氧化碳等職業(yè)性中毒的急性、亞急性和慢性毒性試驗(yàn)以及半致死量測(cè)定。2.腫瘤學(xué)研究(1)近交系小鼠自發(fā)性腫瘤研究,如AKR小鼠白血病發(fā)生率可達(dá)90％,C3H小鼠乳腺癌發(fā)病率達(dá)97％。而C57BL小鼠乳腺癌發(fā)病率極低。,（2）小鼠對(duì)致癌物質(zhì)、射線及某些病毒敏

7、感，進(jìn)行腫瘤模型的復(fù)制?！「腥拘∈蟀籽〔《究烧T發(fā)白血病；感染人類腺病毒可誘發(fā)小鼠肉瘤及淋巴瘤?！∫浦残阅[瘤模型：　將各種實(shí)體瘤、腹水瘤、白血病等一定數(shù)量的瘤細(xì)胞或無(wú)細(xì)胞的濾液（病毒性腫瘤）接種于相關(guān)品系的小鼠，就可以使該品系的一群小鼠帶有相同的腫瘤，這種腫瘤模型經(jīng)常用在篩選抗腫瘤新藥的研究。,(3)免疫缺陷小鼠在腫瘤研究中應(yīng)用。 裸小鼠是一種11號(hào)染色體上隱性裸基因(nu)發(fā)生突變的小鼠。其生理特征為無(wú)胸腺、缺少T細(xì)胞、B細(xì)

8、胞雖存在但功能缺損,屬于免疫缺陷小鼠,可進(jìn)行異體腫瘤移植。,3.免疫學(xué)研究:免疫缺陷小鼠應(yīng)用如:進(jìn)行愛(ài)滋病、紅斑狼瘡相關(guān)研究。4.傳染性疾病研究:小鼠對(duì)多種病原體特別是病毒極為敏感,如流感、腦炎、血吸蟲病5.遺傳學(xué)和遺傳性疾病的研究：如:糖尿病肥胖、遺傳性貧血 轉(zhuǎn)基因小鼠,研究導(dǎo)入基因的作用。,6.老年病學(xué)的研究： 小鼠壽命短,傳代時(shí)間短,隨著鼠齡的增加,機(jī)體內(nèi)的一些生理生化指標(biāo)不斷發(fā)生變化,特別是高齡鼠中老年病明顯

9、增多,是老年學(xué)研究的極好材料。多用于糖質(zhì)、脂質(zhì)、膠原和免疫等方面的研究。7.計(jì)劃生育研究： 小鼠繁殖力強(qiáng),性周期和妊娠期短,生長(zhǎng)快,適合計(jì)劃生育研究。如常用小鼠做抗生育、抗著床、抗早孕、抗排卵等實(shí)驗(yàn)應(yīng)用上的首選動(dòng)物。,8.不宜采用小鼠制作動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究 ：(1)研究體溫變化的試驗(yàn),因?yàn)樾∈篌w溫變化不穩(wěn)定；(2)慢性支氣管炎的試驗(yàn),因?yàn)樾∈髿夤芗爸夤芟俨话l(fā)達(dá)；(3)催吐試驗(yàn),因?yàn)樾∈鬅o(wú)嘔吐反應(yīng);(4)動(dòng)脈粥樣硬化試驗(yàn),

10、因?yàn)樾∈蟛恍纬蓜?dòng)脈粥樣硬化。,三、大鼠（rat）,（一）生物學(xué)特性一般特性：1.對(duì)營(yíng)養(yǎng)缺乏非常敏感，特別是維生素A和氨基酸供應(yīng)不足時(shí)，可發(fā)生典型的缺乏癥狀。2.大鼠不能嘔吐。3.對(duì)外部環(huán)境反應(yīng)敏感。,（二）解剖學(xué)特點(diǎn)1.肝臟共分6葉，再生能力強(qiáng)，部分切除術(shù)后仍可再生。2.無(wú)膽囊。3.心臟的血液供給既來(lái)自冠狀動(dòng)脈，也來(lái)自冠狀外動(dòng)脈。4.無(wú)扁桃體。5.眼角膜無(wú)血管，有棕色脂肪組織。,3.藥物學(xué)研究（ 1 ）藥物毒理學(xué)試驗(yàn)

11、急性、亞急性、慢性毒性試驗(yàn)、生殖毒性試驗(yàn)和藥物依賴試驗(yàn)等;“三致”試驗(yàn)研究。 （ 2 ）藥物藥效研究①副交感神經(jīng)效應(yīng)器接點(diǎn)的藥物研究時(shí)，首選大鼠。②SHR大鼠－－研究高血壓藥物的極好模型。③抗炎藥物藥效評(píng)價(jià)，大鼠踝關(guān)節(jié)對(duì)炎癥反應(yīng)敏感。,4.腫瘤研究：具有較高的腫瘤自發(fā)率，易研究癌變機(jī)理。如，肝癌、肺癌、白血病。5.遺傳疾病研究：具有自發(fā)性遺傳疾病，如白內(nèi)障、尿崩癥、肥胖、高血壓等。6.傳染病研究：多種病原體可使大鼠產(chǎn)生與人

12、相似的疾病，如，慢性支氣管炎，病毒性肝炎，血吸蟲病，鉤蟲病等。,7.口腔醫(yī)學(xué)研究：大鼠牙齒上的琺瑯質(zhì)蛀損在宏觀和微觀上同人的蛀齒相似，可用來(lái)研究齲齒。8. 環(huán)境污染與人類健康的研究：大鼠對(duì)空氣污染非常敏感，重金屬污染也可導(dǎo)致大鼠的病理改變，常作為這方面研究的動(dòng)物模型。,9.不宜采用大鼠制作動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究：⑴研究體溫變化的試驗(yàn),因?yàn)榇笫篌w溫變化不穩(wěn)定；⑵慢性支氣管炎的試驗(yàn),因?yàn)榇笫髿夤芗爸夤芟俨话l(fā)達(dá)；⑶催吐試驗(yàn),因?yàn)榇笫鬅o(wú)嘔

13、吐反應(yīng)；⑷膽囊功能試驗(yàn),因?yàn)榇笫鬅o(wú)膽囊。,四、豚鼠,（一）生物學(xué)特性1.豚鼠對(duì)外界刺激極為敏感。聽覺(jué)發(fā)達(dá)、易驚----怕噪音；短被毛緊貼皮膚----怕高溫、高濕；喜活動(dòng)、愛(ài)群居----不宜單籠飼養(yǎng)。,3. 胃壁簿，盲腸發(fā)達(dá)。4.晚成動(dòng)物，孕期比大、小鼠長(zhǎng)，產(chǎn)仔少，所以品系少。5.自身不能合成維生素C。6.自動(dòng)調(diào)節(jié)體溫能力較差。7.易引起變態(tài)反應(yīng)，產(chǎn)生大量補(bǔ)體。染色體為32對(duì)。,（二）生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用,1.藥物學(xué)研究：

14、⑴妊娠期長(zhǎng)，適用于藥物或毒物對(duì)胎兒后期發(fā)育影響的試驗(yàn)；⑵豚鼠對(duì)多種抗生素類藥物非常敏感，是研究抗生素和青霉素的動(dòng)物模型。 ⑶豚鼠還可用于研究麻醉藥及鎮(zhèn)咳藥的藥效實(shí)驗(yàn)。,2.免疫學(xué)研究：豚鼠血清是所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中補(bǔ)體含量最多的一種, 是過(guò)敏性休克和變態(tài)反應(yīng)研究的首選動(dòng)物。3.傳染病研究：對(duì)多種病原體敏感，用于病原的分離、鑒別、診斷，尤其對(duì)結(jié)核桿菌高度敏感，幼齡豚鼠經(jīng)常用于支原體感染后的病理和細(xì)胞免疫的研究。,3.營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究：體內(nèi)

15、不能合成維生素C，對(duì)其缺乏十分敏感，是研究實(shí)驗(yàn)性壞血病和維生素C生理功能的理想動(dòng)物模型。4.耳科學(xué)研究：聽神經(jīng)對(duì)聲波特別是700～2000Hz的純音最敏感，常用于聽覺(jué)和內(nèi)耳疾病的研究。5.肺水腫研究：切斷頸部?jī)蓚?cè)迷走神經(jīng)可引起肺水腫,復(fù)制典型的急性肺水腫模型,適于觀察出血和血管通透性變化實(shí)驗(yàn),6.不宜采用豚鼠做動(dòng)物模型的研究（1）急性實(shí)驗(yàn)。因?yàn)殡嗍笠赘腥荆つw厚，不宜注射，血管神經(jīng)不易分離； （2）慢性支氣管炎癥實(shí)驗(yàn)。因?yàn)殡?/p>

16、鼠氣管、支氣管腺體不發(fā)達(dá)； （3）嘔吐實(shí)驗(yàn)。因?yàn)殡嗍髧I吐反應(yīng)不敏感。,五. 家兔,（一）生物學(xué)特性1.性情溫順，群居性差。2.家兔喜干怕熱3.有食糞特性4.兔的胸腔構(gòu)造與其它動(dòng)物不同，縱隔將胸腔分左右兩室，互不相通。暴露心臟時(shí)，不需人工呼吸。,5.在回盲處有特有的圓小囊。囊壁富有淋巴濾泡，其粘膜不斷分泌堿性液體，可以中和盲腸中微生物分解纖維素所產(chǎn)生的各種有機(jī)酸，有利于消化吸收。6.屬恒溫動(dòng)物，正常體溫在38.5～39.5℃之

17、間，對(duì)致熱物質(zhì)反應(yīng)敏感，適于用作熱源實(shí)驗(yàn)。 7.兔是反射性排卵的動(dòng)物，生育年齡5～6年。平均壽命8年。8.有特殊的血型和唾液型。染色體22對(duì)。,（二）在生物學(xué)中的應(yīng)用1.免疫學(xué)研究： 生產(chǎn)抗體，制備高效價(jià)和特異性強(qiáng)的免疫血清。2.生殖生理和避孕藥研究：家兔屬刺激性排卵，可用于避孕藥和生殖生理研究。3.發(fā)熱、解熱和檢查致熱源研究：產(chǎn)生熱源反應(yīng)，體溫反應(yīng)靈敏而恒定。用于各類制劑的熱源質(zhì)檢及發(fā)熱解熱機(jī)制研究。,4.眼科研究

18、：家兔眼球大，幾乎成圓形，便于進(jìn)行手術(shù)操作和觀察，也常用于眼科藥物篩選和療效研究。5.皮膚反應(yīng)試驗(yàn)： 兔對(duì)刺激反應(yīng)敏感，反應(yīng)近似于人，常用兔作為毒物、藥物、化妝品等對(duì)皮膚局部作用的研究。6.膽固醇代謝和動(dòng)脈粥樣硬化癥研究：兔對(duì)致病膽固醇的敏感性高，成型快。家兔模型的病變與人類基本相似。7.急性動(dòng)物試驗(yàn)常用兔做失血性休克、腸毒素引起的休克、微血管縫合、阻塞性黃疸等急性試驗(yàn)。,8.其他方面：常利用兔進(jìn)行各種寄生蟲病、畸形學(xué)

19、的研究，生理學(xué)課程常采用家兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。9.不宜用兔作為動(dòng)物模型的研究：（1）觀察嘔吐的試驗(yàn),因?yàn)橥脤?duì)嘔吐反應(yīng)不敏感（2）放射病試驗(yàn),因?yàn)橥脤?duì)射線非常敏感，射線照射后，常發(fā)生休克或死亡；（3）咳嗽試驗(yàn),因?yàn)橥萌狈人苑瓷洌唬?）甲狀旁腺切除術(shù),因?yàn)橥玫募谞钆韵俜植挤稚?，位置不固定?常用實(shí)驗(yàn)器材及手術(shù)器械,一、常用實(shí)驗(yàn)器材儀器換能器:即“傳感器”,是一種能將機(jī)械能、化學(xué)能、光能等非電信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)的器件或裝置。,換能器,

20、,常用的換能器有：1.機(jī)械—電換能器(張力換能器)：此換能器主要用于描 記肌肉、心臟活動(dòng)、平滑肌活動(dòng)、呼吸活動(dòng)等位移和張力實(shí)驗(yàn)。 2.電壓換能器(壓力換能器)：主要用于測(cè)定血壓左心室內(nèi)壓的實(shí)驗(yàn)。血壓換能器能將血壓的壓力變化轉(zhuǎn)換為電流。 3.呼吸換能器:可以測(cè)呼吸波(阻抗；熱敏電阻);也可測(cè)呼吸流量。,期前收縮和代償間隙,（二）刺激電極,⒈普通電極 刺激離體的組織時(shí)常用，電極的金屬絲裝嵌在絕緣的有機(jī)玻璃套內(nèi)，前端裸露少許金屬絲，用

21、以接觸組織。⒉保護(hù)電極 刺激組織時(shí)，避免電流刺激周圍組織，需用保護(hù)電極。電極的金屬絲包埋在絕緣套內(nèi)，前端有一凹槽露出電極絲用于刺激組織。⒊乏極化電極 常用的乏極化電極有銀－氯化銀電極、鋅－硫酸鋅電極和汞－氯化汞電極。,（三）其它儀器,腦立體定位儀 (Stereotaxic )精確定位腦組織和脊髓組織的部位,Morris 水迷宮 （Animal Behavior Monitor System ）,DSI植入式生理信號(hào)遙測(cè)系統(tǒng)：

22、檢測(cè)信號(hào)包括， 1. 壓力信號(hào)，2. 心電信號(hào) 3. 肌電信號(hào) 4. 神經(jīng)電信號(hào) 5. 呼吸信號(hào) 6. 體溫信號(hào)7. 生理活動(dòng),二、常用手術(shù)器械,,常用器械及操作,第三章 常用儀器和設(shè)備,第一節(jié)BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),,,（a）BL-420E+系統(tǒng) （b）BL-420F系統(tǒng)BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),第二節(jié) BI-2000微循環(huán)圖像分析系統(tǒng),第三節(jié) MedLab生物信號(hào)采集處

23、理系統(tǒng),,(一)按原始信號(hào)的性質(zhì)分類1.電信號(hào)：心電、神經(jīng)放電、神經(jīng)干動(dòng)作電位、腦電。,生物信號(hào)類型,2.非電信號(hào)：骨骼肌張力、血壓、 骨骼肌張力、血壓、呼吸道壓力、心肌收縮力、腸肌張力等。,（二）按信號(hào)快慢分類1.快信號(hào)：神經(jīng)干動(dòng)作電位、心室肌動(dòng)作電位、神經(jīng)放電等。2.慢信號(hào)：血壓、呼吸、心電、平滑肌張力等。,生物信號(hào)采集、處理結(jié)果,第四章 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù),一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào),,,二、注射器的使用,三、家兔的基本實(shí)驗(yàn)操作,