ⅰ.中國紅豆杉紫杉烯5α乙?；D(zhuǎn)移酶的基因克隆;ⅱ.銀杏內(nèi)酯環(huán)化酶的基因研究

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文Ⅰ.中國紅豆杉紫杉烯5α-乙?；D(zhuǎn)移酶的基因克隆;Ⅱ.銀杏內(nèi)酯環(huán)化酶的基因研究姓名：宋世東申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生藥學(xué)指導(dǎo)教師：程克棣2001.6.1A B S T R A C TT a x o li s o n eo f t h es t r u c t u r a l l ym o r ec o m p l e xm e m b e r so f t h et a x o i df a m

2、 i l yo fn a t u r a lp r o d u c t sc h a r a c t e r i z e db y t h et r i c y c l i cd i t e r p e n et a x a n e r i n gs y s t e m ．T h e r ea r ea t l e a s t 1 2d i s t i n c t e n z y m e a t i cr e a c t i o n s

3、i n v o v e di n T a x o lb i o s y n t h e s i s ．T h ee a r l y s t e p s i n v o v e t h e c y c l i z a t i o n o fg e r a n y l g e r a n y l d i p h o s p h a t e t O t a x a -4 ( 5 ) ，1 1 ( 1 2 ) 一d i e n eb y t a

4、 x a d i e n es y n t h a s ef o l l o w e db yc y t o c h r o m eP 4 5 0 ．m e d i a t e dh y d r o x y l a t i o n ，w i t h a c c o m p a n y i n gd o u b l e - b o n dr e a r r a n g e m e n t , t o y i e l d t a x a ．

5、4 ( 2 0 ) ，1 1 ( 1 2 ) ·d i e n e - 5 q - 0 1 ．T h i s s e c o n d a r y a l c o h o l i s c o n v e r t e d t o t h ec o r r e s p o n d i n g 5 a —y l a c e t a t e e s t e r ．T h i s s t e p i s c a t a l y z e d

6、 b y t a x a ．4 ( 2 0 ) ，11 ( 1 2 ) - d i e ·5 a ·o l —O - a c e t y l t r a n s f e r a s e ．A c c o r d i n g t o t h e s e q u e n c e o ft a x a d i e n ·5 a ·o l —a c e t y l t r a n s f e r a s

7、ef r o mt h eT a x u sc a n a d e n s i s ．t w op r i m e r sw e r es y n t h e s i z e d a n du s e d f o r P C Ra m p l i f i c a t i o n ．O n e 1 ．3 k b l o n g a m p l i c o n w a so b t a i n e db yP C R m e t h o d

8、 sw i t ht h eL g t l 0c D N A l i b r a r yf r o mt h ec a l l u s o frc h i n e n s i s a sa t e m p l a t e ．T h ea m p l i f i e dc D N A f r a g m e n tw a sl i g a t e dw i t hp M D 18 ．Tv e c t o r t O p e r f o r

9、 m a 缸' t ．h e r s t u d y ．A f t e r s e q u e n c i n g ，t h e a m p l i c o n w a sc o n f i r m e d t ob ea f u l ll e n g t hc D N A i nZc h i n e n s i s ．T h i sc D N A f r a g m e n g s h a sa no p e nr e a d

10、 i n gf r a m eo f13 17n u c l e o f i d e sa n d4 3 9a m i n oa c i d sd e d u c e df r o mt h en u c l e a rs e q u e n c e ．T h e r ea r e18n u c l e o t i d e sa n d6a n l i n oa c i d sd i f f e r e n tb e t w e e n

11、t h e s et w o g e n e s ．T h ei d e n t i t y o ft w ot a x a d i e n - 5 a - o l ·a c e t y l t r a n s f e r a s e c D N Af r a g m e n t sf r o mZc a n a d e n s i sa n dZc h i n e n s 打i si s m o r et h a n9 8

12、％．S e q u e n c ec o m p a r i s o no ft h et a x a d i e n e - 5 Ⅱ- o l - O - a c e t y lt r a n s f e r a s ew i t haf e wo t h e r a c y lt r a n s f e r a s eo fZc a n a d e n s 括a n dZc u s p i d a t ai n d i c a t