中國紅豆杉紫杉烷13α-羥基化酶基因的克隆及表達(dá).pdf

1、曲阜師范大學(xué)碩士學(xué)位論文中國紅豆杉紫杉烷13α-羥基化酶基因的克隆及表達(dá)姓名：馮磊申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：動物學(xué)指導(dǎo)教師：徐承水;王偉20060401中國紅豆杉紫杉烷1 3 ，q 羥基化酶基因的克隆與表達(dá)A B S T R A C T1 1 1 eT 奴o ld i t e q ) e n ei s a 1 1i Ⅱl p o r c a n td n l gf o rt l l et r c 咖e n to f av a r i e

2、t y o fc a l l c e r s ．T h e1 0 w y i e l d o f1 缸o(hù) l 筋m n a n l m ls o u r c e s a 1 1 di n c r e a s i n ga p p l i c a t i o n sO f1 奴o l i nc h e m o t l l e r 印yh a v ep m m p t e di n t e n s e e 筋r t st o i m p r

3、 0 V eb i 0 1 0 9 i c a lp r o d u c t i O n y i e l d o f t h e d n 】g ，t 1 1 a td 印e n d s c r i t i c a l l yu p o n ad e t a i l e du n d e r s t a n d i n go f Ⅱl eb i o s ”m e t i cp a t l l w a y sl e a d i n gt 0

4、T l 觚o la I l d r e l a t e dt a X o i d sa 1 1 d d e f i n i t i o no fu l er e s p o n s i b l ee I l z y m e sa I l d g e n e s ．n eb i o s y n 也e s i s o f1 I 觚o l 舶mp l a n tp r i m a r ym e t a b o l i s m i s av c

5、 r y c o m p l e xp r o c e s s ，i n c l u d i n g a t l e a s t2 0s t e p st oc o n s t n J c ti t st e 心町y c l i cs k e l e t o n 趾d m e a d d i t i o no f t h e v a r i o u s h y d m x y la n d a c y lf I I n c t i o

6、I l a l g r o u p s ．M 蚰y r c s l l l t s 劬m T 奴o l b i o g c n e t i c s c h e m e s s h o wt h a th y d r o x y l a t i o n s a n d a c y l a t i o n sa r e i m p o r t a n t f o r t l l eb i o a c t i v 時o f l 敘0 1 ．I

7、 n t l l i s w o r k ，an e wf u l l ·l e n g t l l h y d r o x y l a s e g e n e 啪so b t a i —n e d b yh o m o l o g y ．b 嬲e d P C Rc l o n j n g s 衄吐e g y ．C o 塒l p l e t e o p e n r e a d i n g f } a m e w a so b

8、t a i n e db yS O E - P C R 鋤p l i 毋i n g ．T h eg e ·n o m i cD N A h a sa no p e n ·r e a d i n gf 婦n eo fl ，4 5 8 n u c l e o t i d e s ，、】l d l i c he n c o d e s4 8 6a 1 1 1 i n oa c i d s 、v i t hac a l c

9、u l a t e dm o l e c u l a rw e i g h to f 5 4 ．7 K D aa l l da 1 1e s t i m a t e dp Io f 9 3 1 ．T h ed e d u c e d 鋤i n oa c i d s e q u e n c er e s e l l 】【b l e s t 1 1 e s e q u e n c e so fo t l l e r c l o n e d

10、h y d r o x y l a s e ( 5 4 —6 0 ％i d c n t i t y ) i I Ⅳ0 1 v e dd i r e c t l y i n T { Ⅸo l b i o s y m h e t i cp a t l l 、Ⅳa y s ．T h e a n a l y s i so fm ed e d u c e d 鋤劬a c i d s e q u e n c e o f 1 3 Ⅱ- 蝎血U x y

11、 l a s e r e v e a l e d s o m e t y p i c a ld l a r a c t e r _ r i s t i c s o f P 4 5 0 s a n dp o s s e s s e d s e V e 腳A —g r o u pP 4 5 0 c o n s e “e dd o m a i 船．T h r o u g h f h r n l e r t r i a l _ a n d &#

12、183;e r r o re x p e d m e n t s ，a s e to f c m n H e c o n d i t i o n sm a t a 1 1 0 w e d p r o d l l c t i o n o f a r e 髂o m I b l e 鋤o u n t o f s o l u b l e e m 可m e w a se s t a b l i s h e d ．S D S ·P A G

13、 Er c s l d tS h o w e d 也砒a p r o t e i n 、Ⅳi 也a na p p a r e n tm 0 1 e c u l a rm 粥so f5 4k D a a p p e a r c d ，s u p p o 血gt h a tt l l e Ⅱe wh y d r o x y l a s eg e n ec 0 1 l l d b en o n n a l l y 仃a n s l a t e

14、 d i n t o a p 咖e i n 曬e x p e c t e d ．T h e g e n e m i g h t g i v e m o r em f ．o Ⅲ1 a t i o Ⅱt 0 T { Ⅸo lb i o s y m h e s i s 鋤dm i g h t b e f I l r t h e r i n 、，e s t i g a 艙d i np l a mm e t d b o l i s m e n 西

15、n e e r i l 培r e s e a r c h ．w ef ．m a l l ya i m sa tg e n i n gd i f f e r e n tp r e c l l r s o r sf - o rs e m i s y I l 也e s i s ，a n d o l 】r w o r k i s s t i l lg o i n g o n ．K e y w o r d sr c h ．w e f ．m a l