人21.5kdambp基因?qū)ι窠?jīng)及相關(guān)細(xì)胞增殖與凋亡作用的研究

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文人21.5kDa MBP基因?qū)ι窠?jīng)及相關(guān)細(xì)胞增殖與凋亡作用的研究姓名：劉戟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳俊杰20040428四川大學(xué)博士學(xué)位論文了M B P , N G F 和B D N F 等 基 因 神 經(jīng) 及 相 關(guān) 細(xì) 胞中 表 達(dá) 及 其 對(duì) 細(xì)胞增殖和凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明M B P , N G F , B D N F 基因分別在神經(jīng)元細(xì)胞、骨髓基質(zhì)千細(xì)胞和人神經(jīng)星形膠質(zhì)

2、瘤細(xì)胞( U - 2 5 1 ) 中 成功表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物具M(jìn) B P 特異抗原活性。 M T T法研究顯示， 2 1 .5 k D aM B P以 及 N G F 和 B D N F 對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞、 骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和人神經(jīng)星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞 ( U - 2 5 1 ) 三種細(xì)胞的 增殖均有明顯的 促進(jìn)作用， 與空 載體轉(zhuǎn)染對(duì)照 組細(xì)胞相比， 2 1 . 5 k D a M B P , N G F 和B D N F轉(zhuǎn)染細(xì)胞具有明顯的抗凋亡

3、作用。H E 染色顯示，2 1 . 5 K D a M B P 及N G F , B D N F 基因 轉(zhuǎn)染 細(xì)胞經(jīng)相同 濃 度H 2 0 2處理后，其細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)無明顯改變。電 子顯微鏡觀察顯示，相同 濃 度和時(shí)間 處 理的2 1 . 5 k D a M B P 及N G F , B D N F 微基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)未見明 顯凋亡改變。 D N A瓊脂糖電泳顯示H 2 0 2 處理的空 載體 對(duì)照組 D N A顯 現(xiàn)出

4、 細(xì) 胞凋亡所 特有的 階 梯狀條帶( D N A L a d d e r ) ， 而2 1 . 5 k D a M B P 及N G F , B D N F 基因轉(zhuǎn)染組 細(xì)胞的D N A瓊 脂糖電 泳圖 譜未見D N A L a d d e r . T U N E L原位熒光標(biāo)記顯示， 正常對(duì)照組細(xì)胞由于 核內(nèi)D N A末降解， 因此不會(huì)被熒光物標(biāo)記， 細(xì)胞核顯淡綠色; H 2 O : 處理的空載體轉(zhuǎn)染組細(xì)胞發(fā)生凋亡、 D

5、 N A 分子大量缺刻或斷裂， 3 ' 端游離一O H 基被熒光 物標(biāo)記， 細(xì) 胞核呈 棕黃色; H 2 0 2 處理的2 1 . 5 k D a M B P及 N G F , B D N F基因 轉(zhuǎn)染組細(xì)胞絕大多數(shù)與正常對(duì)照組相似，細(xì)胞核顯淡綠色，僅少數(shù)個(gè)別細(xì)胞被標(biāo)記 成淡黃色。 流式細(xì)胞儀分析 顯示， H 2 O : 未 處理的 細(xì)胞其自 然凋亡率平均為3 . 5 7 % ;空載體對(duì)照組轉(zhuǎn)染神經(jīng)元細(xì)胞、骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和人神

6、經(jīng)星形膠質(zhì) 瘤細(xì)胞 〔 U - 2 5 1 ) H 2 0 2 處理 后， 其細(xì)胞 凋 亡率顯 著升高， 相同處理的 2 1 . 5 k D a M B P基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞其細(xì)胞凋亡率不足空載體轉(zhuǎn) 染組的 三分之一。 F a s 和C a s p a s e - 3 免 疫 組化法初步證實(shí)空 載體對(duì)照組轉(zhuǎn)染神經(jīng)元細(xì)胞、 骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和人神經(jīng)星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞 ( U - 2 5 1 ) H 2 0 2 處理后， 其細(xì)胞F a s 和C a