Sunitinib對(duì)EGF誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞增殖與凋亡的影響及作用機(jī)制.pdf

1、目的:
　　研究受體酪氨酸激酶抑制劑sunitinib對(duì)EGF誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞(HaCaT/E)增殖與凋亡的影響及內(nèi)在機(jī)制。
　　方法:
　　1.采用細(xì)胞計(jì)數(shù)的方式檢測(cè)EGF對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的影響;
　　2.采用MTT檢測(cè)sunitinib對(duì)HaCaT/E細(xì)胞增殖的影響;
　　3.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)sunitinib對(duì)HaCaT/E細(xì)胞周期，WesternBlot檢測(cè)sunitinib對(duì)HaCaT/

2、E細(xì)胞周期蛋白cyclinD1和cyclinE1的表達(dá)水平的變化;
　　4.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)sunitinib對(duì)HaCaT/E細(xì)胞凋亡的影響，Western Blot檢測(cè)sunitinib對(duì)HaCaT/E細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白cleaved-PARP表達(dá)水平的變化，電鏡觀察sunitinib對(duì)HaCaT/E細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的影響;
　　5.采用Western Blot檢測(cè)sunitinib對(duì)HaCaT/E細(xì)胞Stat3信號(hào)途徑的影

3、響。
　　結(jié)果:
　　1.EGF呈時(shí)間依賴性的增加HaCaT細(xì)胞的數(shù)量，在3d的培養(yǎng)期間內(nèi)，用10 ng/mL EGF處理的HaCaT細(xì)胞在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)數(shù)量顯著高于對(duì)照組細(xì)胞（P均＜0.05）;
　　2.MTT結(jié)果顯示sunitinib抑制HaCaT/E細(xì)胞的增殖，并呈濃度及時(shí)間依賴性（P均＜0.05）;
　　3.Sunitinib呈濃度及時(shí)間依賴性降低HaCaT/E細(xì)胞S期的比例，并抑制細(xì)胞周期蛋白cyclinD

4、1和cyclinE1的表達(dá)水平（P均＜0.05);
　　4.Sunitinib呈濃度及時(shí)間依賴性誘導(dǎo)HaCaT/E細(xì)胞的凋亡，凋亡相關(guān)蛋白cleaved-PARP的表達(dá)量隨sunitinib濃度的增高而出現(xiàn)表達(dá)量上調(diào)(P＜0.05)，電鏡顯示sunitinib處理HaCaT/E細(xì)胞24h后出現(xiàn)細(xì)胞體積變小，核染色質(zhì)邊集，濃縮，細(xì)胞質(zhì)空泡形成等一系列細(xì)胞凋亡征象;
　　5.Sunitinib預(yù)處理可顯著抑制EGF誘導(dǎo)的HaCa