曲克蘆丁對UVB誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制.pdf

1、目的：為研究抗氧化劑曲克蘆丁對中波紫外線（UVB）誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞急性光損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了以下6部分：1.建立UVB照射HaCaT細(xì)胞的光損傷模型。2.觀察不同濃度曲克蘆丁的細(xì)胞毒性及對光損傷后HaCaT細(xì)胞增殖活性的影響。3.觀察不同濃度的曲克蘆丁對光損傷后HaCaT細(xì)胞凋亡情況的影響。4.觀察曲克蘆丁對光損傷后HaCaT細(xì)胞抗氧化酶系統(tǒng)的影響。5.觀察曲克蘆丁對光損傷后HaCaT細(xì)胞內(nèi)MAPK及AP-1信號通路

2、相關(guān)蛋白的影響。6.觀察曲克蘆丁對光損傷后HaCaT細(xì)胞MMP1表達(dá)的影響。
　　方法：HaCaT細(xì)胞所用培養(yǎng)基為含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，并置于5%CO2、37℃及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞分為空白對照組、UVB組、曲克蘆丁組、曲克蘆丁+UVB組。其中UVB組及曲克蘆丁+UVB組予不同劑量的的UVB照射，曲克蘆丁組及曲克蘆丁+UVB組加入不同濃度的曲克蘆丁（1、5、10、20μmol/L）進(jìn)行干預(yù)

3、。用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力，根據(jù)CCK-8法檢測結(jié)果選擇具有最佳保護(hù)作用的藥物濃度（5、10μmol/L）進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。Hoechst染色法觀察照光前后細(xì)胞凋亡情況變化及曲克蘆丁對凋亡的保護(hù)作用。Western blot法檢測加入曲克蘆丁后對UVB輻射后HaCaT細(xì)胞抗氧化酶如SOD，GSH-Px，CAT的改變。同時(shí)用Western blot法檢測加入曲克蘆丁后對UVB輻射后HaCaT細(xì)胞絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路相關(guān)

4、蛋白包括P38、JNK、ERK的表達(dá)變化,以及激活蛋白-1（AP-1）的組件c-Fos、c-Jun的表達(dá)變化。最后，我們還檢測了加入曲克蘆丁后對UVB輻射后HaCaT細(xì)胞MMP1的表達(dá)影響。
　　結(jié)果：CCK-8法檢測各組細(xì)胞增殖活性，用OD值表示。與空白對照相比，不同劑量UVB照射后HaCaT細(xì)胞增殖活性均下降，其中240mJ/cm2的UVB照射后細(xì)胞大量死亡。1、5、10μmol/L的曲克蘆丁對HaCaT細(xì)胞增殖無影響，而20

5、μmol/L的曲克蘆丁則抑制細(xì)胞增殖(P<0．05)。用50 mJ/cm2的UVB照射細(xì)胞，UVB組較空白組細(xì)胞增殖活性明顯降低。而曲克蘆丁(5、10μmol/L)+UVB組的細(xì)胞活性有不同程度上升(均P<0.05)。其中5～10μmol/L的曲克蘆丁有較佳的預(yù)保護(hù)作用(均P<0．05)。Hoechst染色顯示強(qiáng)Hoechst細(xì)胞（強(qiáng)藍(lán)色熒光）UVB組較空白對照組增多，曲克蘆?。?、10μmol/L）+UVB組較UVB組減少。Weste

6、rn blot法提示UVB組抗氧化酶Catalase、SOD、GSH-Px較空白對照組明顯減少，曲克蘆?。?、10umol/L）+UVB組較UVB組表達(dá)升高。50 mJ/cm2的UVB照射后HaCaT細(xì)胞p-P38、p-ERK、p-JNK、p-c-Jun及c-Fos水平升高,曲克蘆丁（5、10umol/L）+UVB組則有不同程度下降。經(jīng)UVB照射后HaCaT細(xì)胞內(nèi)MMP1蛋白表達(dá)明顯升高，用曲克蘆?。?、10umol/L）處理后MMP1

7、明顯下降。
　　結(jié)論：曲克蘆丁對UVB誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞光損傷有一定的保護(hù)作用。
　　目的：為研究抗氧化劑曲克蘆丁對中波紫外線（UVB）誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞急性光損傷的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了以下6部分：1.建立UVB照射HaCaT細(xì)胞的光損傷模型。2.觀察不同濃度曲克蘆丁的細(xì)胞毒性及對光損傷后HaCaT細(xì)胞增殖活性的影響。3.觀察不同濃度的曲克蘆丁對光損傷后HaCaT細(xì)胞凋亡情況的影響。4.觀察曲克蘆丁對光損傷后H

8、aCaT細(xì)胞抗氧化酶系統(tǒng)的影響。5.觀察曲克蘆丁對光損傷后HaCaT細(xì)胞內(nèi)MAPK及AP-1信號通路相關(guān)蛋白的影響。6.觀察曲克蘆丁對光損傷后HaCaT細(xì)胞MMP1表達(dá)的影響。
　　方法：HaCaT細(xì)胞所用培養(yǎng)基為含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，并置于5%CO2、37℃及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞分為空白對照組、UVB組、曲克蘆丁組、曲克蘆丁+UVB組。其中UVB組及曲克蘆丁+UVB組予不同劑量的的UVB

9、照射，曲克蘆丁組及曲克蘆丁+UVB組加入不同濃度的曲克蘆?。?、5、10、20μmol/L）進(jìn)行干預(yù)。用CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力，根據(jù)CCK-8法檢測結(jié)果選擇具有最佳保護(hù)作用的藥物濃度（5、10μmol/L）進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。Hoechst染色法觀察照光前后細(xì)胞凋亡情況變化及曲克蘆丁對凋亡的保護(hù)作用。Western blot法檢測加入曲克蘆丁后對UVB輻射后HaCaT細(xì)胞抗氧化酶如SOD，GSH-Px，CAT的改變。同時(shí)用Western

10、 blot法檢測加入曲克蘆丁后對UVB輻射后HaCaT細(xì)胞絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路相關(guān)蛋白包括P38、JNK、ERK的表達(dá)變化,以及激活蛋白-1（AP-1）的組件c-Fos、c-Jun的表達(dá)變化。最后，我們還檢測了加入曲克蘆丁后對UVB輻射后HaCaT細(xì)胞MMP1的表達(dá)影響。
　　結(jié)果：CCK-8法檢測各組細(xì)胞增殖活性，用OD值表示。與空白對照相比，不同劑量UVB照射后HaCaT細(xì)胞增殖活性均下降，其中240mJ/c

11、m2的UVB照射后細(xì)胞大量死亡。1、5、10μmol/L的曲克蘆丁對HaCaT細(xì)胞增殖無影響，而20μmol/L的曲克蘆丁則抑制細(xì)胞增殖(P<0．05)。用50 mJ/cm2的UVB照射細(xì)胞，UVB組較空白組細(xì)胞增殖活性明顯降低。而曲克蘆丁(5、10μmol/L)+UVB組的細(xì)胞活性有不同程度上升(均P<0.05)。其中5～10μmol/L的曲克蘆丁有較佳的預(yù)保護(hù)作用(均P<0．05)。Hoechst染色顯示強(qiáng)Hoechst細(xì)胞（強(qiáng)藍(lán)色

12、熒光）UVB組較空白對照組增多，曲克蘆?。?、10μmol/L）+UVB組較UVB組減少。Western blot法提示UVB組抗氧化酶Catalase、SOD、GSH-Px較空白對照組明顯減少，曲克蘆丁（5、10umol/L）+UVB組較UVB組表達(dá)升高。50 mJ/cm2的UVB照射后HaCaT細(xì)胞p-P38、p-ERK、p-JNK、p-c-Jun及c-Fos水平升高,曲克蘆?。?、10umol/L）+UVB組則有不同程度下降。經(jīng)U