扇貝多肽調節(jié)iNOS-NO及HSP抑制UVB誘導的HaCaT細胞凋亡.pdf

1、目的：建立iNOS轉染HaCaT細胞模型，利用UVB誘導的HaCaT細胞凋亡模型，從誘導型一氧化氮合酶(iNOS)、一氧化氮(NO)、熱休克蛋白(HSP)及環(huán)氧合酶-2（COX-2）的角度，研究扇貝多肽（Polypeptide from Chlamys farreri，PCF）抑制UVB引起的HaCaT細胞凋亡的分子機制。 方法：建立iNOS穩(wěn)定轉染及瞬時轉染HaCaT細胞模型.復制20 mJ/cm UVB誘導HaCaT細胞凋亡

2、模型。實驗設計分為6組：對照組、UVB模型組、UVB+iNOS特異性抑制劑SMT組、UVB+5.69 mmol/L PCF組、UVB+2.84mmol/L PCF組、UVB+1.42 mmol/L PCF組。以Hoechst33258熒光染色法測定細胞凋亡率；以電子自旋共振法(ESR)檢測UVB照射后細胞內NO生成的經時變化及PCF對其的影響；RT-PCR檢測iNOSmRNA的表達；蛋白質印跡法檢測iNOS、HSP27、HSP70、HS

3、P90及COX-2蛋白的表達。 結果：20 mJ/cm2 UVB可以誘導HaCaT細胞iNOS的mRNA和蛋白表達增高(P<0.05)，進而NO釋放明顯增多(P<0.01)，并且UVB的輻射損傷反饋性的上調HSP70、HSP90的表達(P<0.05)。將iNOS基因轉染HaCaT細胞后，NO釋放量大量增多(P<0.05)。1.42~5.69 mmol/L劑量范圍內的PCF與1 mmol/L SMT能夠明顯抑制UVB引起的HaCa

4、T細胞凋亡（P<0.05）；1.42~5.69mmol/L劑量范圍內的PCF可抑制20 mJ/cm2UVB誘導的HaCaT細胞iNOS表達及NO釋放(P<0.05，P<0.01)，并且可以上調保護性蛋白HSP70、HSP90的表達(P<0.05)：在轉染后的iNOS高表達HaCaT細胞中，PCF可明顯抑制NO的釋放(P<0.01)。 結論：PCF可抑制20 mJ/cm2 UVB誘導的HaCaT細胞凋亡，其作用機理與抑制UVB誘導