纖維素高效降解菌株的選育.pdf

1、纖維素資源的開發(fā)與利用一直是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)，而纖維素的高效降解與糖化是制約纖維素生物質(zhì)應(yīng)用的關(guān)鍵。 本研究從腐爛稻草、朽木條、土壤和牛糞等樣品中分離到6株纖維素降解菌株。通過濾紙崩解試驗(yàn)、剛果紅纖維素平板識別以及液體發(fā)酵產(chǎn)酶鑒定，篩選到一株分解纖維素能力較強(qiáng)的真菌。經(jīng)形態(tài)觀察和18S rDNA基因片斷分析，鑒定該菌株為青霉T24－2。 對青霉T24－2的液態(tài)發(fā)酵條件進(jìn)行研究。菌株在含3％稻草粉、0.25％尿素和無機(jī)

2、鹽營養(yǎng)液的培養(yǎng)基中發(fā)酵4 d，自然pH，30℃，130 r/min，菌株的CMC酶活(羧甲基纖維素酶活)和濾紙酶活分別達(dá)到45.01 IU/mL和6.89 IU/mL。采用液態(tài)發(fā)酵法對該菌酶解稻草粉產(chǎn)糖進(jìn)行研究，糖化率達(dá)到40.2％。 青霉T24-2經(jīng)過EMS和紫外線復(fù)合誘變，結(jié)合纖維素平板選擇培養(yǎng)基篩選技術(shù)，獲得纖維素酶高產(chǎn)誘變株EZ30。與出發(fā)菌株青霉T24-2相比，誘變株EZ30的菌落形態(tài)變化不大，但在固態(tài)發(fā)酵條件下，誘

3、變株EZ30纖維素酶產(chǎn)量和酶解蔗渣的糖化率明顯提高，CMC酶活提高約32.7％，蔗渣糖化率從33.3％提高到40％，但比活力都是15.85 IU/μg左右，表明誘變株EZ30纖維素酶活力的增高只是酶量表達(dá)的增加，纖維素酶結(jié)構(gòu)可能沒有發(fā)生變化。 在相同條件下，利用出發(fā)菌株T24-2與誘變株EZ30同時(shí)降解16 g的蔗渣，以釀酒酵母將糖化液轉(zhuǎn)變成酒精，酒精產(chǎn)量由0.72 g提高到1.10 g。表明變株糖化過程增加的還原糖是可以被釀