2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羥基己酸叔丁酯(AST-7)是合成降血脂藥物阿托伐他汀鈣的關(guān)鍵手性砌塊。生物催化制備手性化合物是目前公認的綠色環(huán)保高效的制備技術(shù)。本文設(shè)計了ATS-7合成新路線,以6-氰基-3,5-二羰基己酸叔丁酯(CDOH)為初始底物,采用兩步酶法不對稱還原生成ATS-7,具有重要研究意義。主要內(nèi)容如下:
  1.以不對稱還原CDOH生成(5R)-6-氰基-5-羥基-3-羰基己酸叔丁酯(ATS-6)為模式反應(yīng)

2、,采用基因挖掘的策略,構(gòu)建了包含八種羰基還原酶的酶庫,但均末檢測到不對稱還原CDOH的催化活性;
  2.以不對稱還原ATS-6生成ATS-7為模式反應(yīng),采用基因挖掘的策略,構(gòu)建了包含六種醛酮還原酶的酶庫。醛酮還原酶SCAKR,PKAKR,CGAKR,KMAKR,NCAKR,ZBAKR實現(xiàn)了可溶性表達,其中醛酮還原酶SCAKR對ATS-6具有較高的催化活性,酶活為672U/L;
  3.研究了醛酮還原酶SCAKR的酶學(xué)性質(zhì),

3、其分子量大小約為38kDa,在pH7.0,25℃時活性最高且保持較好穩(wěn)定性。SCAKR不對稱還原ATS-6的Km值為32.04mM,vmax值為1.99U/mg,kcat值為0.259s-1。經(jīng)培養(yǎng)基優(yōu)化和搖瓶發(fā)酵條件優(yōu)化后酶活達到1281U/L;
  4.由于不對稱還原ATS-6時需要輔酶NADPH輔酶的參與,因此選擇葡萄糖脫氫酶為輔酶再生酶構(gòu)建了再生體系,綜合考慮成本和催化效率,確定重組菌E.coli BL21(DE3)/pE

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