細(xì)胞器定位型雙光子極性探針的設(shè)計(jì).pdf

1、萘酰亞胺熒光染料具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、易于修飾、光穩(wěn)定性好、熒光量子產(chǎn)率高、環(huán)境敏感、較大的雙光子截面積等優(yōu)秀的光物理性質(zhì)而被廣泛應(yīng)用于熒光探針領(lǐng)域。應(yīng)用于檢測(cè)亞細(xì)胞器生理變化的探針成為目前發(fā)展的熱點(diǎn)。定位于亞細(xì)胞器同時(shí)又能檢測(cè)其中物質(zhì)變化的探針被大量報(bào)道。本研究基于萘酰亞胺連接不同亞細(xì)胞器定位基團(tuán)，開發(fā)了監(jiān)測(cè)溶酶體膜和線粒體膜微環(huán)境變化的雙光子熒光探針。用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)溶酶體和線粒體發(fā)生生理變化過程中其膜形態(tài)以及膜微環(huán)境極性的變化。
　　設(shè)

2、計(jì)合成了特異性定位于溶酶體膜的微環(huán)境極性探針MITHPN。測(cè)試了其在不同極性溶劑中的吸收光譜、熒光發(fā)射光譜、熒光量子產(chǎn)率、熒光壽命以及雙光子性質(zhì)。光物理性質(zhì)顯示其對(duì)不同極性環(huán)境具有很好的響應(yīng)。通過細(xì)胞共定位實(shí)驗(yàn)確定其能專一的定位于溶酶體上，并通過氯喹誘導(dǎo)自噬實(shí)驗(yàn)和微球吞噬實(shí)驗(yàn)分別觀察溶酶體膜在自噬和吞噬過程中的形態(tài)變化。通過熒光壽命成像實(shí)驗(yàn)得到正常溶酶體膜極性在39.02-38.85Kcal·mol-1之間，在氯喹刺激融合過程中其極性變

3、小。此外，由于探針的具有很好的雙光子性質(zhì)成功的實(shí)現(xiàn)雙光子共聚焦顯微成像。
　　設(shè)計(jì)并合成了線粒體膜微環(huán)境極性探針PAHPN。測(cè)試了探針PAHPN在不同極性溶劑中的紫外吸收光譜、熒光發(fā)射光譜、熒光量子產(chǎn)率、熒光壽命以及雙光子性質(zhì)，結(jié)果顯示PAHPN光物理性質(zhì)對(duì)環(huán)境極性敏感。通過細(xì)胞共定位實(shí)驗(yàn)確定其能專一的定位于線粒體上，并通過CCCP刺激實(shí)驗(yàn)和饑餓凋亡實(shí)驗(yàn)分別觀察線粒體膜的形態(tài)變化。熒光壽命成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析得到正常線粒體膜極性平均值