攜載納米粒的ECM給藥體系提高多西紫杉醇對(duì)腦膠質(zhì)瘤治療效果的研究.pdf

1、目的：針對(duì)大多數(shù)化療藥物在腫瘤治療中存在滲透性差和滯留時(shí)間短的問題，納米粒作為抗腫瘤藥物載體具有改變藥物在組織中的分布、提高穩(wěn)定性和降低藥物毒性等特點(diǎn)。為了進(jìn)一步延長(zhǎng)藥物在腫瘤部位的滯留時(shí)間，本論文將完整的大鼠腦去細(xì)胞支架作為藥物儲(chǔ)庫(kù)吸附載藥納米粒，從而實(shí)現(xiàn)藥物在腫瘤部位的長(zhǎng)效滯留。論文中還制備了一種具有腫瘤粘附性及穿透性的新型陽(yáng)離子納米粒，包載經(jīng)典的抗腫瘤藥物多西紫杉醇，該載藥納米粒與去細(xì)胞支架相互粘附形成多個(gè)微型藥物儲(chǔ)庫(kù)，并分別對(duì)它

2、們進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)，旨在為臨床提供一種新的高效低毒制劑。同時(shí)，為了克服血腦屏障的存在阻礙許多對(duì)病灶區(qū)有治療作用的藥物如抗癌藥、抗生素和肽類等的進(jìn)入，我們采用瘤內(nèi)注射的給藥方式將吸附有載藥納米粒的支架勻漿后直接注射在腫瘤部位，使藥物高濃度的聚集在病灶區(qū)，以顯著提高治療效果。本論文在課題組前期研究基礎(chǔ)上，利用創(chuàng)新制備的維生素E琥珀酸酯-接枝-（ε-多聚賴氨酸）聚合物自組裝形成的納米粒結(jié)合去細(xì)胞支架技術(shù)，探索攻克抗腫瘤藥物對(duì)于腦膠質(zhì)瘤高復(fù)發(fā)、低

3、療效的治療瓶頸。
　　方法：⑴利用維生素E琥珀酸酯-接枝-（ε-多聚賴氨酸）聚合物自組裝的制劑技術(shù)制備載藥納米粒，通過粒徑、Zata電位和包封率的測(cè)定，制備出符合注射要求的載藥納米粒制劑。⑵根據(jù)課題組成熟的去細(xì)胞支架制備方法，以符合要求的制備方法與工藝條件制備健康大鼠的腦去細(xì)胞支架。以去細(xì)胞支架的形態(tài)、去細(xì)胞化的程度及主要成分等作為考察指標(biāo)，制備出符合實(shí)驗(yàn)要求的去細(xì)胞支架。⑶在pH值和藥物含量等參數(shù)相同的條件下，通過HPLC法測(cè)量

4、不同時(shí)間點(diǎn)藥物的含量，考察不同制劑間藥物的累積釋放量及釋放時(shí)間，結(jié)合納米粒在去細(xì)胞支架復(fù)合物中的體外釋放行為，確定藥物在納米粒及去細(xì)胞支架復(fù)合物中的釋放形式。⑷通過細(xì)胞水平上腫瘤球的穿透和生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)，模擬體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)情況，考察納米粒結(jié)合去細(xì)胞支架的復(fù)合物抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。⑸采用課題組成熟的腦膠質(zhì)瘤建模方法建立C6/SD大鼠腦膠質(zhì)瘤模型，通過實(shí)時(shí)在體示蹤不同制劑組藥物在腫瘤部位注射后不同時(shí)間點(diǎn)(3 d、7 d、14 d)的分布情況，

5、考察納米粒對(duì)腫瘤組織的穿透性及去細(xì)胞支架作為藥物儲(chǔ)庫(kù)延長(zhǎng)藥物在腫瘤部位的作用時(shí)間。⑹以C6/SD大鼠腦膠質(zhì)瘤為模型，將包載多西紫杉醇的納米粒粘附去細(xì)胞支架的復(fù)合物（DTX-NPs-dBECM complex）為治療藥物，通過單次瘤內(nèi)注射載藥量相同的不同制劑進(jìn)行抗腫瘤治療。通過考察腫瘤體積抑制率、大鼠生存時(shí)間以及HE染色變化等指標(biāo)評(píng)價(jià)抗腫瘤效果；通過免疫組化法測(cè)定Ki67、Caspase3和CD31等腫瘤相關(guān)蛋白的含量，探索DTX-NPs

6、-dBECM復(fù)合物的抗腫瘤機(jī)制。
　　結(jié)果：①制備的載藥納米粒平均粒徑為32 nm，納米粒對(duì)稱分布，分散均勻，形態(tài)圓整，穩(wěn)定性好。本實(shí)驗(yàn)制備的多西紫杉醇納米粒帶正電，其 Zata電位為17.7 mV，載藥量為3.99％，包封率達(dá)73.37%。②制備的去細(xì)胞支架形態(tài)完整，去細(xì)胞化完全，較好的保留了纖維連接蛋白、層粘連蛋白、IV型膠原和粘多糖等細(xì)胞外基質(zhì)成分。③體外釋放實(shí)驗(yàn)證明納米粒作為藥物載體可以起到緩釋作用，而去細(xì)胞支架吸附載藥納

7、米粒進(jìn)一步的延長(zhǎng)了藥物的釋放時(shí)間。④細(xì)胞水平的腫瘤球?qū)嶒?yàn)證明制備得到的納米粒具有較強(qiáng)的腫瘤穿透能力，結(jié)合了去細(xì)胞支架的納米粒復(fù)合物能更好的促進(jìn)藥物進(jìn)入腫瘤深部，吸附納米粒的去細(xì)胞支架復(fù)合物制劑組較單純?nèi)芤航M和單純納米粒組均顯示明顯的抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。⑤體內(nèi)的示蹤實(shí)驗(yàn)表明瘤內(nèi)注射不同制劑后，在相同時(shí)間點(diǎn)，吸附納米粒的去細(xì)胞支架復(fù)合物制劑組相較于溶液組與納米粒組腫瘤部位具有更高濃度的藥物聚集，并且藥物釋放的時(shí)間更長(zhǎng)。⑥體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，攜載納

8、米粒的去細(xì)胞支架給藥體系可以非常有效地提高多西紫杉醇在腫瘤部位的濃度和滯留時(shí)間，對(duì)腦膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)有顯著抑制作用。
　　結(jié)論：建立了一種新型的遞送系統(tǒng)，使用dBECM作為藥物儲(chǔ)庫(kù)，延長(zhǎng)可穿透的DTX-NPs在腫瘤治療中的保留時(shí)間。通過體外實(shí)驗(yàn)表明，不論從單層細(xì)胞模型或膠質(zhì)瘤球模型中均證明C6細(xì)胞對(duì)DTX-NPs-dBECM復(fù)合物的攝取是呈現(xiàn)時(shí)間依賴性的，并且DTX-NPs-dBECM復(fù)合物比游離DTX溶液或DTX-NPs顯示出更強(qiáng)的