熒光光度法二氫葉酸還原酶抑制劑篩選模型的建立和應用.pdf

1、二氫葉酸還原酶(dihydrofolatereductase，DHFR，EC1.5.1.3)是核酸代謝中關鍵的酶之一，是癌癥藥物治療中的主要靶酶，近年來得到廣泛的研究。二氫葉酸還原酶抑制劑能選擇性的與二氫葉酸還原酶結合，抑制其催化還原活性，使二氫葉酸不能順利轉變?yōu)樗臍淙~酸，阻礙葉酸代謝，干擾DNA和蛋白質的合成，最終導致細胞死亡，所以二氫葉酸還原酶抑制劑具有抗癌、抗菌和抗瘧的作用。近年來，有關二氫葉酸還原酶抑制劑的研究主要集中在新的抗癌

2、類藥物的合成及其定量構效關系的研究。因此有必要建立一種快速、準確、簡單易行的方法對合成藥物進行體外篩選。本文圍繞熒光光度法二氫葉酸還原酶抑制劑的篩選體系的建立與應用，進行了如下的工作： 第一章綜述了酶活力的測定方法，影響酶催化反應的因素，熒光分析方法在酶分析中的應用。 第二章通過對二氫葉酸還原酶催化反應的反應物二氫葉酸、NADPH和產物四氫葉酸、NADP熒光性質的研究，用從Sigma公司購置商品酶建立了用熒光光度法測定二

3、氫葉酸還原酶活力的體系，并應用于抑制劑的篩選。用建立方法對一些已知的二氫葉酸還原酶抑制劑進行檢測，所得結果與文獻報道結果一致。 第三章為了節(jié)約試劑成本，克服購置商品酶因活力較低而導致的實驗現(xiàn)象不明顯，實驗條件難以實現(xiàn)，重現(xiàn)性較差等缺點，進一步優(yōu)化二氫葉酸還原酶抑制劑篩選模型，本文按照Kaufman等方法，對從雞肝中提取二氫葉酸還原酶進行了研究，并對每一步提取步驟的蛋白濃度和酶活力進行檢測，得到進一步實驗所需要的酶產品，效果較為滿