順序注射可更新表面固相熒光分析系統(tǒng)的研究及應用.pdf

1、論文由三部分組成.第一章對順序注射可更新表面技術(shù)的發(fā)展現(xiàn)狀進行了綜述.介紹了該技術(shù)的原理、特點、發(fā)展歷史及其在免疫分析、細胞功能檢測、酶反應檢測等領(lǐng)域的應用.第二章建立了順序注射可更新表面固相熒光分析系統(tǒng).此系統(tǒng)由順序注射儀、自制的芯片式流通池和商品熒光儀組成.順序注射系統(tǒng)與芯片式流通池偶聯(lián)用于試樣的在線化學反應、微珠的引入和排放、及試樣在微珠上的吸附.自制的芯片式流通池用于截留C18微珠,微珠表面可吸附疏水的熒光物質(zhì).芯片式流通池與商

2、品熒光儀通過一根多股雙岔光纖偶聯(lián)用于原位固相熒光的檢測.該研究將順序注射可更新表面固相熒光分析系統(tǒng)應用于藥物制劑中維生素B<,1>的測定.在堿性環(huán)境中,維生素B<,1>在線被鐵氰化鉀氧化,產(chǎn)物硫色素被截留在芯片式流通池中的C18微珠吸附富集并原位檢測,熒光的激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為385nm和433nm.方法的檢測限為0.03μg/ml,分析速度為30次/小時,C18微珠的消耗量為1.0mg/次,2μg/ml 維生素B<,1>連續(xù)進樣1

3、1次得到的相對標準偏差為1.0﹪.該法測定維生素B<,1>片劑、復方維生素B片劑和復方維生素B糖漿中的維生素B<,1>含量,與藥典規(guī)定的標準方法的測定結(jié)果一致.第三章將順序注射可更新表面固相熒光分析系統(tǒng)用于人體血清中免疫球蛋白G(IgG)的檢測.該法根據(jù)非均相夾心式免疫分析原理,采用包被蛋白質(zhì)A的Sepharose CL-4B凝膠微珠為固相載體,結(jié)合羊抗人IgG抗體作為固相抗體,以異硫氰酸酯熒光素(FITC)標記第二抗體作為熒光檢測探針

4、.首先,將固相抗體注入芯片式流通池,固相抗體被截留;其次,注入人IgG試樣,IgG與固相抗體結(jié)合;再次,注入FITC標記抗體,標記抗體與IgG結(jié)合,三者形成雙抗體夾心體系.通過檢測FITC標記二抗的熒光強度,可確定血清中免疫球蛋白G(IgG)的含量.該法采用可更新表面技術(shù),固相抗體一次性使用,減少了測定所需的時間,加快了分析速度.在0.2-7.0μg/ml范圍內(nèi),IgG與熒光強度有良好的線性關(guān)系,R=0.9988.高、中、低三種濃度血清