新型可更新表面電化學(xué)免疫傳感器檢測(cè)雌二醇的研究.pdf

1、本研究以β-雌二醇為目標(biāo)物，通過(guò)對(duì)抗體進(jìn)行疏水化處理，構(gòu)建了一種可更新表面的電化學(xué)免疫傳感器，實(shí)現(xiàn)了電化學(xué)傳感器工作電極表面敏感膜的快速更新，克服了以往免疫傳感器抗體固定化過(guò)程繁瑣、敏感膜重現(xiàn)性差、再生困難等方面的不足，為電化學(xué)傳感器敏感膜的構(gòu)建及在線檢測(cè)提供了一種新方法。主要研究?jī)?nèi)容包括:
　　采用混合酸酐法將雌二醇半抗原與卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)，用BCA試劑盒蛋白定量、紫外光譜、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-P

2、AGE)鑒定偶聯(lián)結(jié)果。紫外掃描結(jié)果表明通過(guò)混合酸酐法制備的半抗原與OVA偶聯(lián)物的摩爾吸收系數(shù)約為93238，顯著大于半抗原和載體蛋白。SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示偶聯(lián)物純度較高。通過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到β-雌二醇的檢出限為0.52μg/L，證實(shí)單克隆抗體與類(lèi)似物己烯雌酚和孕酮的交叉反應(yīng)率小于0.01％，具有較高的特異性和親和力。用β-雌二醇對(duì)自來(lái)水進(jìn)行加標(biāo)回收并用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)定回收率在78％和134％之間。

3、>　　采用活性酯法活化抗體上的羧基，以氨基壬烷作為疏水化試劑對(duì)抗雌二醇單克隆抗體進(jìn)行了疏水化處理，實(shí)驗(yàn)考察了反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)介質(zhì)、卵磷脂濃度等因素對(duì)反應(yīng)結(jié)果的影響，凝膠電泳及電化學(xué)兩種方法鑒定了抗體的疏水化效果及活性。結(jié)果表明:在室溫條件下，疏水化反應(yīng)3小時(shí)，卵磷脂濃度為1mg/mL時(shí)抗體與抗原響應(yīng)較好。
　　實(shí)驗(yàn)采用三電極檢測(cè)系統(tǒng)，以Ag/AgCl電極為參比電極，Pt電極為對(duì)電極，修飾抗體成膜液的玻璃電極為工作電極，KCl作為電解