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文檔簡介
1、層析是生物分離技術(shù)中最有效及最廣泛應(yīng)用的方法之一,具有分離效率高、選擇性好、設(shè)備簡單、便于自動化控制、分離過程溫和及分離機(jī)理多樣化等優(yōu)勢。層析分離廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、基因工程藥物等多種生物對象的分離純化,其中層析介質(zhì)是關(guān)鍵要素之一。本文采用離子液體直接溶解纖維素,探討纖維素微球制備的新方法,并功能化成層析介質(zhì),應(yīng)用于生物分離。主要包括以下三方面內(nèi)容:
第一,纖維素微球制備工藝的優(yōu)化及孔道擴(kuò)增。選取三種纖維素原料-精制棉、脫脂
2、棉和微晶纖維素,利用離子液體BmimC(l)直接溶解纖維素制備黏膠,以環(huán)己烷或淀粉作為制孔劑,采用反相懸浮和降溫固化法,制備得到多孔纖維素微球??疾炝死w維素種類及濃度、油水比、攪拌轉(zhuǎn)速、固化劑加入量、制孔劑種類及加入量等影響,優(yōu)化了制備條件。所制纖維素微球的球形度好,粒徑80~300μm,濕真密度約1.01g/ml,孔度95%左右,平均孔徑約40nm,比表面積為90m2/ml,是一種生物大分子層析分離的良好基質(zhì)。結(jié)果表明,環(huán)己烷擴(kuò)孔效果
3、較好,有利于生物大分子分離。
第二,纖維素介質(zhì)制備及蛋白吸附性能。將微晶纖維為原料制備的未擴(kuò)孔、淀粉擴(kuò)孔和環(huán)己烷擴(kuò)孔微球分別偶聯(lián)上陰離子交換配基DEAE,得到三種弱陰離子交換介質(zhì)Cell-M-DEAE、Cell-S-DEAE和Cell-C-DEAE,考察了離子交換容量、靜態(tài)吸附、動態(tài)吸附及穿透行為。離子交換容量均在250μmol/ml左右;Cell-C-DEAE的靜態(tài)吸附容量較低,但有效擴(kuò)散系數(shù)高,吸附速率快,10%穿透時
4、動態(tài)吸附容量高。結(jié)果表明,擴(kuò)孔微球的動態(tài)吸附性能得到改善,環(huán)己烷擴(kuò)孔比淀粉擴(kuò)孔效果好。將微晶纖維素-環(huán)己烷擴(kuò)孔微球偶聯(lián)上疏水性電荷誘導(dǎo)配基MMI,制備得到新型介質(zhì)Cell-C-MMI,考察了卵黃抗體IgY的靜態(tài)和動態(tài)吸附性能。發(fā)現(xiàn)pH中性條件下飽和吸附容量大,pH4時吸附能力顯著減弱,加入適量硫酸銨有助于IgY吸附。
第三,疏水性電荷誘導(dǎo)層析分離卵黃抗體。采用HCIC介質(zhì)Cell-C-MMI,從蛋黃粉中分離卵黃抗體IgY,
5、考察了上樣和洗脫pH的影響,優(yōu)化了分離條件。結(jié)果表明,合適的上樣pH為8.0,洗脫pH為4.0,分離得到IgY純度為70.1%,收率為75.6%,純化倍數(shù)為2.7。新型HCIC介質(zhì)對IgY有良好的分離性能,但I(xiàn)gY純度有待進(jìn)一步提高。
本文圍繞纖維素微球介質(zhì),開展了介質(zhì)制備、功能化和應(yīng)用研究。實現(xiàn)了離子液體直接溶解纖維素,制備纖維素微球,簡化了黏膠制備工藝,過程綠色環(huán)保。所制備的纖維素新型介質(zhì),具有吸附容量高、分離性能優(yōu)良
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