新型疏水電荷誘導(dǎo)色譜介質(zhì)的吸附性能及熱力學(xué)研究.pdf

1、疏水電荷誘導(dǎo)色譜（HCIC），根據(jù)疏水相互作用在中性pH值下吸附蛋白，在溫和pH值條件下通過靜電排斥作用洗脫蛋白。HCIC無需對原料進(jìn)行預(yù)處理，即無需調(diào)整pH值，離子強(qiáng)度等，因此降低了生物分離純化的成本。本文以用于抗體純化為目標(biāo)，結(jié)合疏水電荷誘導(dǎo)色譜和抗體分離的特點，合成了新型疏水電荷誘導(dǎo)色譜介質(zhì)。本文主要描述了HCIC色譜介質(zhì)的活化，配基的篩選與合成及吸附蛋白的研究，其主要內(nèi)容包括以下幾個方面： 1.以瓊脂糖凝膠Sepharo

2、se CL-6B為基質(zhì)合成了HCIC介質(zhì)，以烯丙基溴活化法活化介質(zhì)，活化的反應(yīng)條件為：30％AB，4 mol/L NaOH和一定量的DMSO，反應(yīng)時間為24 h，反應(yīng)溫度為25℃，反應(yīng)轉(zhuǎn)速為170 rpm。在此條件下，活化密度可達(dá)200-220μmol/ml。 2.合成了新型疏水電荷誘導(dǎo)色譜介質(zhì)。將配基SLC-AN偶聯(lián)至介質(zhì)Sepharose CL-6B。在50℃下進(jìn)行配基的偶聯(lián)反應(yīng)，調(diào)整配基的用量，獲得了配基修飾密度分別為94

3、、71和39μmol/ml的色譜介質(zhì)。 3.對不同條件下制備介質(zhì)對γ球蛋白和BSA的靜態(tài)吸附容量進(jìn)行了研究。γ球蛋白主要通過疏水作用與配基結(jié)合，具有耐鹽特性；而BSA主要通過靜電作用與配基結(jié)合，在高鹽條件下吸附量很低。γ球蛋白和BSA在pH8.0條件下達(dá)到最大吸附容量，吸附容量均隨pH降低而減少，因此可以通過降低pH來達(dá)到蛋白的解吸。 4.使用等溫滴定微量熱儀（ITC）研究蛋白質(zhì)與色譜介質(zhì)間的相互作用力，結(jié)果表明，ITC