疏水電荷誘導(dǎo)層析分離抗體的研究.pdf

1、高純度單克隆抗體（mAb）在醫(yī)學(xué)和免疫學(xué)中有著越來越廣泛的應(yīng)用，因此如何從大規(guī)模細胞培液中高效分離純化mAb有著非常重要的實用價值和現(xiàn)實意義。 本研究采用針對mAb純化而設(shè)計的介質(zhì)MEP HyperCel，對不同類型的mAb的分離純化進行了研究。選用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)考察介質(zhì)的吸附能力，用BSA、血紅蛋白和溶菌酶對MEP HyperCel介質(zhì)的吸附性能進行了研究。結(jié)果表明，血紅蛋白與介質(zhì)作用太強，而BSA在介質(zhì)上的吸附行為沒有典型規(guī)律。

2、在pH6．0到9．0之間，溶菌酶在MEPHyerCel介質(zhì)上的吸附行為符合Langmuir等溫吸附，蛋白質(zhì)與介質(zhì)之間的親和力隨著pH的升高而增強，鹽濃度的增加也會導(dǎo)致吸附容量的增加。MEP HyperCel介質(zhì)對所選用的幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白的吸附以疏水作用為主。但由于同時存在誘導(dǎo)電荷的原因，其吸附機理相對復(fù)雜 研究肺癌單克隆抗體IgM在MEP HyperCel介質(zhì)上的分離工藝。通過試驗比較辛酸．硫酸銨沉淀法和PEG沉淀法初步純化細胞培養(yǎng)

3、上清液中的抗肺癌單抗IgM，5% PEG6k溶液對IgM有較好的選擇性，IgM的純度和收率分別達到65．7%和96．2%。通過靜態(tài)吸附試驗，確定IgM在MEP HyperCel介質(zhì)的靜態(tài)吸附容量。在pH5．0～8．0的范圍內(nèi)，吸附行為很好的復(fù)合Langmuir方程，在pH8．0條件下靜態(tài)吸附容量達最大值97．6 mg/g。通過動態(tài)吸附實驗確定IgM起始濃度和上樣鹽濃度分別為1mg/ml和0．15M NaCl，過高的上樣流速（225cm/

4、h）會導(dǎo)致吸附容量的降低，在操作流速75cm/h的條件下動態(tài)吸附容量為29．7mg/ml。在上樣液中添加10 mM的EDTA鈉鹽可以有效阻止色譜柱吸附色素，在緩沖液沖洗后添加25mM辛酸鹽沖洗步驟可以除去部分雜質(zhì)蛋白，且不顯著影響產(chǎn)品的收率。介質(zhì)經(jīng)10次循環(huán)分離后柱效下降，需要進行再生處理，處理后介質(zhì)分離性能回復(fù)至原狀。通過實驗建立的工藝流程，使得抗肺癌單抗IgM的純度達到95．2%，收率為84．4%，實現(xiàn)了產(chǎn)品的純化目的。 研

5、究雞卵黃抗體IgY在MEP HyperCel介質(zhì)上的分離。在比較硫酸銨沉淀和PEG6k沉淀兩種方法從卵黃提取物中初步純化卵黃抗體IgY，綜合收率和純度考慮，最終選擇40%飽和度的硫酸銨沉淀粗提物中的IgY。優(yōu)化IgY初提物在MEP HyperCel介質(zhì)上的洗脫pH值，在pH4．0條件下，IgY洗脫峰出現(xiàn)明顯側(cè)肩，有雜質(zhì)蛋白存在。增加洗脫pH至5．0，洗脫液中仍含有分子量比輕鏈還小的雜質(zhì)蛋白。降低上樣pH值至7．0，并在pH5．0條件下洗