疏水性電荷誘導(dǎo)層析分離抗HER2和抗IL-12-23單克隆抗體研究.pdf

1、單克隆抗體（單抗）作為重要的生物技術(shù)藥物，具有巨大的市場需求和開發(fā)潛力，傳統(tǒng)的蛋白A親和層析分離存在一些不足，因此開發(fā)經(jīng)濟高效的單抗分離新方法和新介質(zhì)具有十分重要的意義。疏水性電荷誘導(dǎo)層析(HCIC)作為近年來發(fā)展迅速的抗體分離新方法，具有一定優(yōu)勢，但分離工藝和配基結(jié)構(gòu)有待進一步優(yōu)化。本論文選擇兩種典型的單抗藥物，抗HER2單抗和抗IL-12/23單抗，探討HCIC從CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分離單抗，考察吸附性能，優(yōu)化分離條件，比較分析商

2、業(yè)化介質(zhì)和本課題組開發(fā)的新型HCIC介質(zhì)，為單抗規(guī)模化分離純化提供了新思路。
　　首先，將典型的HCIC介質(zhì)MEP HyperCel應(yīng)用于CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清液中抗HER2單抗的分離?？疾炝思?xì)胞培養(yǎng)液上清液的特性，發(fā)現(xiàn)溫度和pH對單抗穩(wěn)定性有一定影響?？疾炝薓EP HyperCel介質(zhì)對抗HER2單抗的吸附性能，發(fā)現(xiàn)中性pH時吸附容量較高，酸性pH時吸附容量顯著下降?？疾炝丝笻ER2單抗的動態(tài)載量，優(yōu)化了分離工藝，確定了合適的上樣和

3、洗脫條件，實現(xiàn)了細(xì)胞培養(yǎng)液中抗HER2單抗的高效分離，純度達(dá)到94.6％，得率約0.1mg/(ml料液)。
　　其次，采用本課題組設(shè)計和制備的HCIC介質(zhì)ABI，以氨基苯并咪唑為功能配基，從CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分離抗白介素12/23單抗（抗IL-12/23單抗），并與MEP HyperCel介質(zhì)比較。結(jié)果表明，ABI介質(zhì)對單抗的吸附性能良好，靜態(tài)吸附容量略低于MEP HyperCel介質(zhì)，但動態(tài)載量較高，受流速影響小，適合于高流

4、速操作。優(yōu)化了單抗分離工藝，包括上樣和洗脫過程，確定了合適的分離條件，實現(xiàn)了細(xì)胞培養(yǎng)液中高效分離單抗，pH3.6條件下洗脫單抗純度達(dá)到98.6％，收率為93.0％，明顯優(yōu)于MEP HyperCel介質(zhì)。
　　最后，采用本課題組設(shè)計、具有雙功能配基色氨酸-氨基苯并咪唑的新型HCIC介質(zhì)W-ABI，從CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分離抗IL-12/23單抗。結(jié)果表明，pH對W-ABI介質(zhì)吸附單抗影響顯著，中性pH范圍內(nèi)吸附容量較高，酸性pH條

5、件下可以通過靜電排斥作用實現(xiàn)解吸。W-ABI介質(zhì)的動態(tài)載量受流速影響較小，高流速條件下仍保持較高的載量，性能優(yōu)于MEP HyperCel介質(zhì)。優(yōu)化洗脫pH后，單抗純度達(dá)97.2％，收率達(dá)93.3％，收率高于蛋白A親和層析，洗脫組分中宿主細(xì)胞殘留量(HCP)明顯低于MEP HyperCel分離，顯示出良好的應(yīng)用前景。
　　本論文圍繞哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)液中高效分離單抗，從提高HCIC分離抗體的效率出發(fā)，對分離工藝進行了優(yōu)化，探討了兩種新