鹽析萃取偶聯(lián)柱層析分離純化血漿蛋白.pdf

1、血漿蛋白由數(shù)百種具有廣泛生理功能的蛋白質(zhì)組成，其中白蛋白與免疫球蛋白占據(jù)著血液制品中主要的市場份額。血漿成分十分復(fù)雜，目前工業(yè)上血漿蛋白的分離方法主要采用有機(jī)溶劑沉淀法、鹽析法和柱層析，但這些方法尚存在著分離環(huán)境要求低溫、分離純化步驟繁瑣、純度和收率低等缺點。本論文開展了親水性有機(jī)溶劑鹽析萃取偶合柱層析分離純化血漿蛋白的研究，以期為血漿蛋白的分離純化提供新方法。
　　(1)首先考察了免疫球蛋白G(IgG)在親水性有機(jī)溶劑鹽析萃取中

2、的分配規(guī)律，選取磷酸氫二鉀、碳酸鈉、檸檬酸鈉三種鹽分別與乙醇組成鹽析萃取體系，考察了不同鹽、醇含量對IgG在體系中分配的影響。結(jié)果表明，20％磷酸氫二鉀(w/w)-14％乙醇(w/w)、19％碳酸鈉(w/w)-13％乙醇(w/w)、25％檸檬酸鈉(w/w)-19％乙醇(w/w)為三種鹽析萃取體系的最佳組成，在這些條件下，IgG回收率分別為97.4％、93.1％、90.2％。采用ELISA法檢測了磷酸氫二鉀-乙醇、碳酸鈉-乙醇兩種體系萃取

3、后IgG的活性，發(fā)現(xiàn)經(jīng)磷酸氫二鉀體系萃取后，IgG活性基本維持不變，而經(jīng)碳酸鈉體系萃取后，IgG活性損失率達(dá)70％以上。
　　(2)將20％磷酸氫二鉀(w/w)-14％乙醇(w/w)鹽析萃取體系調(diào)節(jié)pH至7.0后，直接從豬血漿中萃取IgG與白蛋白，鹽析萃取能明顯去除部分雜質(zhì)蛋白，葡萄糖的去除率達(dá)51.82％。根據(jù)上相中富含鹽的特點，選取疏水層析作為后續(xù)純化手段，可得到較高純度的白蛋白與IgG混合物，該混合物再經(jīng)過陰離子交換層析后，