CYP2A5酶活性改變對小鼠體內(nèi)NNK和NNN代謝影響研究.pdf

1、煙草特有亞硝胺（Tobacco-Specific Nitrosamines，TSNAs）是僅存于煙草及煙氣中的一類有害物質(zhì)，是煙草調(diào)制過程中由煙草生物堿通過亞硝化作用形成的氮亞硝胺類化合物，主要包括4-(甲基亞硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮（NNK）、N-亞硝基降煙堿（NNN）、N-亞硝基假木賊堿（NAB）和N-亞硝基新煙草堿（NAT）。其中致癌性最強的是NNK和NNN，被國際癌癥組織（IARC）列為Ⅰ類人體致癌物，研究表明NN

2、K和NNN與肺癌、胰腺癌、食道癌等癌癥的發(fā)生有關(guān)。TSNAs需要細(xì)胞色素P450酶（Cytochrome P450，CYP450）的介導(dǎo)生成與DNA反應(yīng)的中間體，形成DNA加合物，從而引發(fā)突變和癌癥。通過化學(xué)藥物抑制或誘導(dǎo)使一種或幾種P450酶亞型的活性發(fā)生改變，進(jìn)而測定NNK和NNN代謝的變化，可間接反應(yīng)特定P450酶亞型在NNK和NNN代謝中的作用。研究內(nèi)容主要包括以下三個部分：
　　一、選用5-甲氧基補骨脂素（5-Metho

3、xypsoralen，5-MOP）為CYP2A5酶抑制劑，吡唑為CYP2A5酶誘導(dǎo)劑，對小鼠體內(nèi)CYP2A5酶活性進(jìn)行調(diào)節(jié)，建立了 CYP2A5酶抑制和誘導(dǎo)兩種酶活調(diào)節(jié)小鼠模型。并以香豆素為探針底物，建立了測定小鼠血液中香豆素及其代謝物的超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜（UPLC-HRMS）法，通過測定7-羥基香豆素的生成量評估5-MOP和吡唑?qū)π∈驝YP2A5酶活性的影響。該方法準(zhǔn)確性好，分析效率高，測定結(jié)果與通過試劑盒檢測肝微粒體中CYP

4、2A5活性的結(jié)果相一致，5-MOP有效抑制了CYP2A5的香豆素7-羥基化，而吡唑起到了明顯誘導(dǎo)作用。
　　二、通過UPLC-HRMS方法，對NNK在正常小鼠、5-MOP處置小鼠和吡唑處置小鼠的血液、肝臟和肺組織中的代謝特征進(jìn)行研究，通過對比NNK各主要代謝產(chǎn)物在三種不同模型小鼠之間的差異，推測出 CYP2A5酶可能參與調(diào)控NNK的α-亞甲基羥基化代謝途徑。同樣采用高分辨質(zhì)譜法，對三種小鼠體內(nèi)NNN及其主要代謝物定量分析，通過對比

5、NNN及其主要代謝物在三種小鼠體內(nèi)的代謝差異，推測出CYP2A5酶可能參與調(diào)控NNN的2-羥基化代謝途徑。
　　三、建立了一種定量分析C57BL/6小鼠組織中DNA甲基化加合物6-氧-甲基鳥嘌呤（6-O-MeG）的超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜方法，并分別對NNK染毒后生理鹽水對照組、吡唑處理組和5-MOP處理組小鼠肝臟和肺中6-O-MeG的含量進(jìn)行了測定。6-O-MeG在0.05~10.00 ng/mL內(nèi)線性良好（R2=0.9998