納米光學生物傳感在纖維蛋白檢測中的研究.pdf

1、纖維蛋白是血液凝固的重要成分之一，它是在循環(huán)系統(tǒng)中由纖維蛋白原經凝血酶作用轉變而成的，發(fā)揮著凝血和生理止血的功能。纖維蛋白還參與體內的炎癥、組織損傷、組織修復等一系列病理和生理過程。因此，對纖維蛋白的結構和功能的深入研究不僅有助于我們認識纖維蛋白在凝血過程中的重要地位，也為我們在科研和臨床治療方面提供了新的思路。
　　近年來，隨著納米科技的發(fā)展，納米材料已廣泛應用于生物傳感技術。本論文利用納米金和單壁碳納米管的納米特性，建立非標記

2、檢測纖維蛋白的方法。具體內容如下：
　　一、基于納米金內濾效應，非標記、高靈敏檢測纖維蛋白
　　納米金（AuNPs）可調且較寬的吸收帶與許多熒光供體重合，可用作熒光猝滅劑。本工作將利用納米金的內濾效應，建立簡單、快速、高靈敏檢測纖維蛋白的新方法。本工作制備了吸收峰為520 nm的納米金，可強烈吸收熒光素鈉（FAM）的熒光，產生內濾效應。在纖維蛋白的存在下，AuNPs與纖維蛋白相互作用，從而誘導 AuNPs聚集，吸收峰紅移，內

3、濾效應降低，熒光恢復。在最優(yōu)化的條件下，纖維蛋白的濃度在0.125–2.5 nM范圍內呈現(xiàn)一個良好的線性關系?；貧w線方程是ΔF=360.7+92.7c（c是纖維蛋白的濃度，nM），相關系數(shù)為0.9989，該方法的最低檢出限為40 pM。與傳統(tǒng)的熒光檢測方法相比，該方法具有快速、簡單、方便、易于操作，已成功的應用于人體血漿樣品的定量檢測。
　　二、基于單壁碳納米管降低背景信號高靈敏檢測纖維蛋白
　　本實驗基于單壁碳納米管（SW

4、NTs）良好的熒光猝滅作用，運用熒光分析方法，對纖維蛋白進行高靈敏檢測。本實驗選用的溴化乙錠是一種高度靈敏的熒光染色劑，與Fib相結合，熒光強度增大，與纖維蛋白相結合，熒光強度也可增大。但兩者熒光強度相近，難以區(qū)分，因此加入SWNTs。SWNTs不僅能吸附與Fib相結合的EB，而且還能吸附游離在溶液中的 EB，使得背景信號降低，熒光被猝滅。加入 SWNTs后，由于纖維蛋白的特殊結構，空間位阻較大，纖維蛋白較難被吸附，所以 SWNTs對熒

5、光的猝滅作用較弱，熒光強度較強。據(jù)此可利用SWNTs能夠猝滅熒光，降低體系背景信號的作用來對纖維蛋白進行檢測。在最優(yōu)的條件下，纖維蛋白的濃度在1.25-10 pM范圍內呈現(xiàn)一個良好的線性關系?；貧w線方程為ΔF=70.99+4.634C（C是纖維蛋白的濃度，pM），線性相關系數(shù)R為0.9921，相對標準偏差的范圍在3.5％-6.3%，該方法的最低檢出限為0.5 pM。與傳統(tǒng)的熒光檢測方法相比，該方法省時，簡單，方便，易于操作，而且成功的應

6、用于人體血漿樣品的定量檢測。
　　三、小檗堿和纖維蛋白的作用研究
　　小檗堿屬于季銨型異喹啉類生物堿，具有極弱熒光性。本工作研究發(fā)現(xiàn)纖維蛋白原與小檗堿作用后，產生一個強熒光峰；纖維蛋白也可與小檗堿作用，產生熒光峰。但兩者難以區(qū)分，因此在實驗中引入了SWNTs。首先讓SWNTs與Fib和纖維蛋白分別結合然后加入到小檗堿溶液中。Fib纏繞在碳納米管表面，無法與小檗堿作用，其熒光強度極低；而纖維蛋白的空間位阻大，遠離 SWNTs，