基于DNAzyme信號放大策略的光學(xué)生物傳感檢測研究.pdf

1、光學(xué)分析檢測方法具有簡便、高效、高速、高靈敏度等優(yōu)勢。本論文利用熒光法和比色法作為信號輸出檢測手段，基于DNAzyme信號放大技術(shù)，結(jié)合近年來生物分子檢測的新方法，設(shè)計了兩種蛋白酶分子識別傳感器和DNA生物傳感器，主要開展的工作包括以下內(nèi)容:
　　(1)近年來，科學(xué)家們發(fā)展了基于分子燈標(biāo)或者納米燈標(biāo)作為信號的熒光法用于T4多核苷酸激酶的檢測。然而，很多檢測方法都有一定的局限性，比如沒有做到信號的循環(huán)放大來降低檢測限。為了克服這個局

2、限性，我們對其進(jìn)行了進(jìn)一步的設(shè)計和改進(jìn)。在原來的基礎(chǔ)上我們引進(jìn)了Pb2+-DNAzyme結(jié)構(gòu)，在新的莖環(huán)中要包埋著Pb2+-DNAzyme的特定序列，通過λ外切酶輔助切割釋放出該序列，循環(huán)切割分子燈標(biāo)產(chǎn)生熒光信號，從而實(shí)現(xiàn)熒光信號的增強(qiáng)與放大，提高檢測靈敏度。因此它是一個非常有前景的傳感器。
　　(2)提高生物傳感器的靈敏度往往有兩種方法:降低背景信號或增強(qiáng)輸出信號。科學(xué)家們已經(jīng)廣泛通過應(yīng)用各種酶切靶標(biāo)循環(huán)、滾環(huán)擴(kuò)增等放大方法增強(qiáng)

3、信號輸出;利用金納米顆粒，碳納米管，和石墨烯氧化物猝滅熒光信號來降低信號背景。但是獲得低背景甚至零背景依然是一個不小的挑戰(zhàn)。然而到目前為止，很少有人把這兩種策略運(yùn)用到一個體系中去提高檢測靈敏度。本實(shí)驗(yàn)中，我們將這兩種策略結(jié)合到一起，成功運(yùn)用于T4多核苷酸激酶的檢測，并通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)該體系擁有較強(qiáng)的信噪比，因此它是一個非常有前景的通用型的檢測平臺。
　　(3)通過DNAzyme信號放大技術(shù)，基于DNA鏈?zhǔn)诫s交，利用納米金顆粒作為信號輸