葡萄與葡萄酒單體酚分析測(cè)定方法的研究.pdf

1、葡萄與葡萄酒中酚類(lèi)物質(zhì)主要分為兩類(lèi)：非類(lèi)黃酮(羥基苯甲酸類(lèi)、羥基肉桂酸類(lèi)、芪類(lèi)化合物)和類(lèi)黃酮(花色苷類(lèi)、黃烷-3-醇類(lèi)、黃酮醇類(lèi))。這些酚類(lèi)物質(zhì)是葡萄中重要的次生代謝產(chǎn)物，與葡萄的抗病性、采后運(yùn)輸、貯存、保鮮以及葡萄酒的色澤、風(fēng)味等品質(zhì)指標(biāo)密切相關(guān)(如咖啡酸、兒茶素等)。另外，葡萄與葡萄酒中的酚類(lèi)物質(zhì)(槲皮素和一些酚酸類(lèi))具有很強(qiáng)的抗氧化作用，對(duì)人體健康十分有益。所以，對(duì)葡萄與葡萄酒中咖啡酸、兒茶素等常見(jiàn)的重要的單體酚的分析檢測(cè)具有重

2、要的意義。 目前，高效液相色譜(HPLC)主要用于葡萄與葡萄酒中酚類(lèi)物質(zhì)的檢測(cè)。該方法具有分辨率高、分析速度快、重復(fù)性好、定量分析準(zhǔn)確和精確度高等優(yōu)點(diǎn)。但是由于葡萄與葡萄酒中酚類(lèi)物質(zhì)種類(lèi)繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，所以利用HPLC分析測(cè)定葡萄與葡萄酒中酚類(lèi)物質(zhì)時(shí)往往會(huì)遇到各個(gè)酚類(lèi)物質(zhì)分離困難等問(wèn)題，這就使得HPLC分析測(cè)定前樣品預(yù)處理十分重要。國(guó)內(nèi)外利用HPLC測(cè)定葡萄與葡萄酒中沒(méi)食子酸、兒茶素等幾種常見(jiàn)的單體酚類(lèi)物質(zhì)的已有報(bào)道，但是利用H

3、PLC測(cè)定時(shí)樣品前處理方法的研究報(bào)道則很少且沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。本論文研究的目的在于建立利用HPLC同時(shí)測(cè)定葡萄與葡萄酒中咖啡酸、兒茶素等幾種重要的單體酚類(lèi)物質(zhì)時(shí)樣品前處理的方法。 獲得的主要研究結(jié)果如下： 1.葡萄中單體酚的分析測(cè)定方法 (1)葡萄中單體酚的提取方法取赤霞珠葡萄果實(shí)5 g研磨后溶于25 mL70％甲醇中，加入80 mg抗壞血酸(溶于15 mL純水中)，再加入10 mL6 mol鹽酸，將所有溶液置于1

4、00 mL，的容量瓶中，超聲波處理10 min，密閉后在35℃條件下避光提取12 h，12000xg 4℃離心20 min，將上清液在40℃條件旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去掉甲醇，用30 mL乙酸乙酯萃取一次之后再用20 mL乙酸乙酯萃取兩次，合并所有萃取液，在40℃條件旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干再溶于5 mL50％色譜甲醇中，經(jīng)0.45 μm有機(jī)濾頭過(guò)濾后HPLC測(cè)定。 (2)葡萄中單體酚的HPLC測(cè)定色譜柱：Hibar RT Lichrospher反相C1

5、8柱，250×4.0 mm，5 μm；流速：0.8 mL/min；柱溫：30℃。檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。梯度洗脫：流動(dòng)相A：水：乙酸(98:2)；流動(dòng)相B：乙腈。洗脫程序：0～10 min，B為16％；10～25 min，B為20％～40％；25～30 min，B為40％～0％。 2.葡萄酒中單體酚的分析測(cè)定方法 (1)樣品預(yù)處理方法選擇：本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)液/液萃取(Liquid/liquid extraction，LLE)

6、、固相萃取柱萃取(Solid phase extration，SPE)二種前處理方法的最佳萃取參數(shù)、回收率和精確度進(jìn)行了研究。通過(guò)研究，得到了如下結(jié)論： 液/液萃取法萃取葡萄酒樣中單體酚時(shí)最佳參數(shù)為：酒樣溶液pH=2，乙酸乙酯用量為3×50 mL，萃取時(shí)間為10 min。通過(guò)該方法對(duì)葡萄酒進(jìn)行預(yù)處理后，利用HPLC測(cè)定，各個(gè)單體酚回收率在80.28％～91.69％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.72％～3.69％。 固相萃取柱(

7、C18)法萃取葡萄酒樣中單體酚時(shí)最佳參數(shù)為：最佳pH為酒樣溶液的自然pH，最佳萃取溶劑0.1 mol/LHCL：甲醇1:4(v/v)，溶劑消耗量為15 mL，通過(guò)該方法對(duì)葡萄酒進(jìn)行預(yù)處理后，利用HPLC測(cè)定，各個(gè)單體酚回收率為23.37％～91.26％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.98％～2.82％。 通過(guò)對(duì)LLE和SPE預(yù)處理方法比較可知，固相萃取柱萃取法雖然精密度較液液萃取法要高一些，但是個(gè)別單體酚回收率相對(duì)較低，而且固相萃取柱萃取時(shí)

8、需使用固相萃取裝置和萃取柱(C18柱)，所以成本要比液液萃取高。液/液萃取法用于葡萄酒中10種單體酚分析測(cè)定，具有回收率較高，操作簡(jiǎn)單，試驗(yàn)中無(wú)需貴重儀器等特點(diǎn)。 考慮到回收率，成本問(wèn)題，本實(shí)驗(yàn)選擇液液萃取法為葡萄酒中單體酚分析檢測(cè)預(yù)處理方法。 (2)葡萄酒中單體酚的HPLC測(cè)定色譜柱：Hibar RT Lichrospher反相C18柱，250x4.0mm，5μm；流速：1.0 mL/min；柱溫；30℃。檢測(cè)波長(zhǎng)：2