基于酶促反應(yīng)的流動注射電化學(xué)發(fā)光分析法的研究.pdf

1、本文簡要回顧了電化學(xué)發(fā)光(ECL)分析法的發(fā)展歷史及其應(yīng)用，介紹了它的主要反應(yīng)體系及其反應(yīng)機(jī)理，ECL與其他分析方法的聯(lián)用技術(shù)，詳細(xì)描述了發(fā)光試劑魯米諾的發(fā)光原理及應(yīng)用，以及固定酶的一些方法。在制備微柱狀酶反應(yīng)器的基礎(chǔ)上，結(jié)合流動注射和電化學(xué)發(fā)光分析法，成功建立了測定鳥嘌呤、硫鳥嘌呤、阿昔洛韋、膽固醇的流動注射-電化學(xué)發(fā)光分析法。本論文的主要研究內(nèi)容有以下幾個部分。
　　1.基于鳥嘌呤、硫鳥嘌呤與酶柱中的黃嘌呤氧化酶反應(yīng)生成過氧化

2、氫，繼而與魯米諾發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的原理，建立了流動注射電化學(xué)發(fā)光測定鳥嘌呤、硫鳥嘌呤的新方法，并將其應(yīng)用于實(shí)際藥品的檢測。在pH=9.0的0.05mol/L的硼砂介質(zhì)、激發(fā)電位為0.65V、魯米諾濃度為5.00×10-4mol/L、流速為1.20mL/min的優(yōu)化條件下，測定鳥嘌呤的線性范圍為4.53×10-2μg/mL～10.6μg/mL，線性相關(guān)系數(shù)為0.9994，檢出限為2.0×10-3μg/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.40％(n

3、=9);測定硫鳥嘌呤的濃度線性范圍為0.50μg/mL～32.3μg/mL，回歸方程為:IECL=40.75C(μg/mL)+194.6，相關(guān)系數(shù)為0.9995，檢出限為0.12μg/m。對于實(shí)際藥品硫鳥嘌呤片的測定，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.60％（n=9），加標(biāo)回收率為97.8％～107％。
　　2.基于阿昔洛韋與酶柱中的黃嘌呤氧化酶反應(yīng)生成過氧化氫，繼而與魯米諾發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的原理，建立了流動注射電化學(xué)發(fā)光測定阿昔洛韋的新方法

4、，并將其應(yīng)用于實(shí)際藥品的檢測。在pH=9.0的0.05mol/L的硼砂介質(zhì)、激發(fā)電位為0.65V、魯米諾濃度為5.00×10-4mol/L、流速為1.90mL/min的優(yōu)化條件下，測定阿昔洛韋的濃度線性范圍為0.56～22.5μg/mL，線性相關(guān)系數(shù)為0.9995，檢出限為0.32μg/mL，測定實(shí)際藥品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.80％（n=9），加標(biāo)回收率為95.5％～108％。
　　3.基于膽固醇與酶柱中的膽固醇氧化酶反應(yīng)生成過氧

5、化氫，繼而與魯米諾發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的原理，建立了流動注射電化學(xué)發(fā)光測定膽固醇的新方法，并將其應(yīng)用于實(shí)際藥品的檢測。在pH=8.0的硼砂緩沖溶液中、激發(fā)電位為0.65V、魯米諾濃度為5.00×10-4mol/L、流速為1.90mL/min的優(yōu)化條件下，測定阿昔洛韋的線性范圍為8.00×10-2μg/mL～19.3μg/mL，線性相關(guān)系數(shù)為0.9991，檢出限為3.80×10-3μg/mL，測定實(shí)際藥品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.42％（n=9