GN10與α-CT相互作用及對(duì)酶構(gòu)象和活性的調(diào)控.pdf

1、表面活性劑與酶的混合體系已得到廣泛應(yīng)用，例如藥物設(shè)計(jì)，化妝品產(chǎn)業(yè)以及洗滌劑等方面，并被用于研究膜蛋白和脂質(zhì)之間的相互作用。酶與表面活性劑的作用已有很多相關(guān)報(bào)道，多為傳統(tǒng)的單鏈表面活性劑，例如烷基三烷基溴化銨類陽(yáng)離子表面活性劑、2-乙基己基琥珀酸酯磺酸鈉(AOT)、十二烷基硫酸鈉(SDS)等陰離子表面活性劑和聚氧乙烯等非離子型表面活性劑。具有對(duì)稱雙極性頭和雙鏈的雙子(Gemini)型表面活性劑對(duì)酶影響的相關(guān)報(bào)道較少。近年來(lái)Gemini型表

2、面活性劑被廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域，更進(jìn)一步增加了酶-表面活性劑體系中表面活性劑對(duì)酶結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性的研究意義。
　　基于α-糜蛋白酶(α-CT)作為水解類蛋白酶的典型代表，其結(jié)構(gòu)和催化機(jī)理已被廣泛研究，因此我們選擇α-CT作為本論文工作的模型酶。由于正電荷Gemini型表面活性劑間隔基團(tuán)(spacer)的烷基鏈長(zhǎng)度可改變，由此能夠調(diào)控表面活性劑頭基的親水性。進(jìn)一步參照具有較大疏水性的十六烷基三丁基溴化銨(CTBAB)激活α-CT的結(jié)果

3、，選擇了C12C10C12Br2(GN10)作為本論文工作的添加劑和激活劑。本論文內(nèi)容主要包括以下幾個(gè)方面:
　　1.通過(guò)紫外-可見(jiàn)光譜法(UV-vis)、熒光光譜法和等溫滴定量法(ITC)研究陽(yáng)離子Gemini型表面活性劑GN10與α-CT間的相互作用。通過(guò)紫外和熒光光譜可以得到蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)及其變化的信息，而量熱測(cè)量可以了解相互作用的熱力學(xué)行為。
　　2.在緩沖溶液中通過(guò)紫外法測(cè)量GN10作用下α-CT催化乙酸-2-奈酯

4、(2-NA)的水解反應(yīng)。對(duì)不同培育時(shí)間下GN10對(duì)α-CT催化活性的影響進(jìn)行測(cè)量。在GN10的濃度低于臨界膠束濃度(cmc)時(shí)α-CT被活化，但是一天之后其殘余活性相較于不含GN10的情況較低。
　　3.運(yùn)用差示掃描量熱儀(DSC)對(duì)不同溫度下GN10與α-糜蛋白酶之間的相互作用進(jìn)行探究，以變性溫度進(jìn)行表征。GN10存在下變性峰向低溫方向偏移，并且在高溫一側(cè)出現(xiàn)肩峰，這很可能意味GN10作用下具有不同的變性機(jī)理。另外我們測(cè)量了GN