拳卷地錢中脂溶性成分的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及生物活性研究.pdf

1、論文在整理大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，以苔蘚植物地錢中藥用活性成分為目標(biāo)，對(duì)廣西產(chǎn)拳卷地錢(Marchantia convoluta Gao et chang)進(jìn)行了生藥鑒別及脂溶性部位化學(xué)成分的分析、提取、純化、分離與生物活性研究，從苔蘚植物拳卷地錢中提取分離了一類具有明顯生物活性的成分一乙酸乙酯部位。系統(tǒng)地研究了拳卷地錢中萜烯類化合物的提取、純化、分離的工藝條件，所得到的單體通過(guò)HPLC、UV、IR、ItNMR、MSGC-MS等儀器手段進(jìn)行定

2、性、定量分析，確定了其結(jié)構(gòu)。生物活性實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)拳卷地錢乙酸乙酯部位具有明顯的抑制肝癌細(xì)胞和肺癌細(xì)胞的作用。為開(kāi)發(fā)拳卷地錢新藥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)與基礎(chǔ)。具體內(nèi)容摘要如下： 1．樣品鑒別。通過(guò)紫外譜線組法對(duì)廣西境內(nèi)3種地錢屬植物，地錢(Marchantia polymorpha)、拳卷地錢(Marchantia convoluta)以及粗裂地錢(Marchantiapaleacea)，進(jìn)行了生藥鑒別，三種地錢的不同溶劑提取物的紫外吸

3、收光譜不但吸收強(qiáng)度有差異，而且主要吸收峰的位置也有差異，這提供了一種簡(jiǎn)單又準(zhǔn)確的生藥鑒別方法。 2．脂溶性部位的化學(xué)成分分析。采用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)拳卷地錢的石油醚部位和乙酸乙酯部位化學(xué)成分進(jìn)行了初步研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)這兩部位化學(xué)成分差異較大，石油醚部位有機(jī)酸酯(10種)含量較高，其中(z)-11-Hexadecenoic acid和n-Hexadecenoic acid的含量達(dá)9.80％和20.29％，而含萜烯及其含氧衍生

4、物較少；乙酸乙酯部位萜烯及其含氧衍生物含量較高，其中Phytol，Benzothianzole和Cedrol含量分別達(dá)到25.80％，14.97％和20.69％，另含有多種酯類化合物，而含有機(jī)酸很少。首次從地錢屬植物中檢測(cè)出雪松醇(Cedro1)。 3．揮發(fā)性成分的提取。采用超臨界流體二氧化碳萃取拳卷地錢中揮發(fā)性成分，從溫度，壓力，改性劑加入量，萃取時(shí)間，動(dòng)態(tài)流量這五個(gè)因素著手，采用五因素四水平的正交試驗(yàn)，篩選出最佳萃取條件：

5、萃取釜壓力15M Pa，溫度50℃，改性劑乙醇加入30 mL，萃取時(shí)間2h，動(dòng)態(tài)流量10L／h。并對(duì)超臨界萃取物和乙醇提取物進(jìn)行了GC-MS和I-IPLC對(duì)比分析，超臨界萃取物中不含有黃酮類化合物，且揮發(fā)性成分比乙醇提取物復(fù)雜。 4．石油醚部位單體的分離鑒定。通過(guò)硅膠柱層析分離石油醚部位得到β-谷甾醇和豆甾醇2個(gè)植物甾醇成分，采用UV、IR、NMR、MS等儀器手段進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。 5．脂溶性部位的生物活性實(shí)驗(yàn)研究。通過(guò)

6、體外細(xì)胞試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯部位對(duì)H1299小細(xì)胞肺癌細(xì)胞和HepG2肝癌細(xì)胞有明顯的抑制作用，而石油醚部位對(duì)H1299肺癌細(xì)胞和HepG2肝癌細(xì)胞沒(méi)有明顯的作用。乙酸乙酯部位15、30、40、50μg／mL分別作用于HepG2細(xì)胞或H1299細(xì)胞24 h后，與對(duì)照組相比，H1299細(xì)胞活性分別下降了6.31、17.65、18.96和23.89％，HepG2細(xì)胞活性分別下降了42.88、53.66、57.31和69.17％，細(xì)胞代謝MTT