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1、中文摘要酪蛋白激酶1家族(CaseinKinase1Family—CKl)在細(xì)胞的很多生理生化功能方面發(fā)揮著調(diào)節(jié)作用,并在Wnt/Winless和Hedgehog等信號(hào)途徑中發(fā)揮著重要作用。本文對(duì)人源CKlY的一個(gè)同源結(jié)構(gòu)域一果蠅CKl(Gilgamesh—I、)進(jìn)行了蛋白表達(dá)、純化及結(jié)晶。晶體形成后,運(yùn)用X射線晶體衍射方法對(duì)晶體進(jìn)行了初步分析,其分辨率可達(dá)285A,屬于尸43212空間群,晶胞參數(shù)a=b=52025A,c=291727
2、A。果蠅Gilgamesh—I蛋白晶體結(jié)構(gòu)由分子置換的方法確定。結(jié)構(gòu)解析發(fā)現(xiàn)它有一個(gè)保守的催化區(qū)域及一個(gè)相對(duì)活躍的構(gòu)象。結(jié)構(gòu)比較表明Gilgamesh—I結(jié)構(gòu)域存在一個(gè)位于Ccl螺旋和p4折疊中間的延伸的環(huán),然而正是這段折疊環(huán)對(duì)其活性和功能起著調(diào)節(jié)作用。關(guān)鍵詞:果蠅CKl;結(jié)晶;結(jié)構(gòu);折疊環(huán);信號(hào)通路目錄弓I言1第1章材料與方法311材料3111實(shí)驗(yàn)材料3112試劑3113實(shí)驗(yàn)儀器3114試劑配制412實(shí)驗(yàn)方法6121果蠅cDNA文庫(kù)的
3、獲得6122果蠅Gilgamesh—I蛋白序列信息8123目的基因的克隆9125目的蛋白的表達(dá)13126目的蛋白的純化15227賴氨酸甲基化20128蛋白結(jié)晶20129結(jié)構(gòu)的解析與完善21第2章實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論2321果蠅Gilgamesh—I蛋白的表達(dá)純化及賴氨酸甲基化2322果蠅GilgameshI蛋白晶體學(xué)研究一27221果蠅GilgameshI蛋白晶體篩選與優(yōu)化2723果蠅Gilgamesh—I蛋白晶體數(shù)據(jù)的收集與處理2824果蠅
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