掃描電化學顯微術檢測試劑刺激細胞引起細胞呼吸活性及酶活性的變化.pdf

1、本文主要就掃描電化學顯微術檢測試劑刺激細胞引起細胞呼吸活性及酶活性的變化進行了研究，文章的主要內容如下： 第一章研究了Br-，CN-及N3-三種試劑對單個細胞呼吸活性的抑制情況。在測定細胞呼吸活性時，將SECM探頭的電位恒定于O2發(fā)生還原反應的電位，此時測得的峰電流一部分是由細胞呼吸所消耗掉的O2引起的，另一部分是由貼壁細胞的突起造成的負反饋引起的，我們在測定過程中扣除了細胞突起引起的負反饋電流。通過測定試劑刺激細胞不同時間時細

2、胞的呼吸活性研究了試劑對細胞呼吸活性的抑制情況。 第二章研究了Br-，CN-及N3-三種試劑對單個活細胞中髓過氧化物酶(MPO)的抑制情況，用SECM測定了單個活細胞中的MPO。在測定細胞內MPO時先用SECM的收集模式確定了測定MPO的最佳條件。又利用毛地黃皂苷(Dig)能溶解細胞膜上的膽固醇的性質，在細胞膜上產(chǎn)生微孔。此時細胞內的大分子(如酶)仍然被禁錮在細胞內部，而小分子物質(如酶的底物和產(chǎn)物)則可以進出細胞。經(jīng)過Dig處

3、理后的細胞仍能存活。這樣既保證細胞形態(tài)上的完整性，又能用SECM來測定細胞內的MPO。當溶液中加入MPO的底物(H2Q和H2O2)后，它們可以擴散到細胞內，并在細胞內MPO的催化下發(fā)生反應生成BQ和水，生成的BQ和水擴散到細胞外。當SECM探頭的電位恒定于BQ發(fā)生還原反應的電位時，用SECM就可以測得細胞周圍BQ的還原電流。當加入抑制MPO活性的試劑時，MPO活性下降。通過測定試劑刺激細胞不同時間時MPO的活性，研究了試劑對MPO活性的

4、抑制情況。 第三章采用亞微米半徑金電極測定了單個活性內的MPO。用苯酚與2-烯丙基苯酚電聚合法制備了用于SECM的金亞微米電極。比較了半徑為5μm，680nm，432nm的金電極掃描細胞內MPO活性的掃描曲線發(fā)現(xiàn)：隨著探頭半徑的減小，掃描曲線的峰電流降低，峰寬變窄。當探頭半徑降至432nm時，掃描曲線的峰電流降至5pA?？紤]到儀器噪音為1pA，所以再減小探頭的半徑測定細胞內的MPO是不可能的，即用納米電極測定細胞內的MPO是不可