掃描電化學(xué)顯微術(shù)構(gòu)建酶圖形及全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)檢測鼠IgG.pdf

1、本論文共包括三部分：第一部分為前言；第二部分為論文的第一章，即掃描電化學(xué)顯微術(shù)“浸筆法”，構(gòu)建辣根過氧化物酶的微米點(diǎn)；第三部分為論文的第二章，即全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)檢測單個鼠IgG分子。 在前言中對掃描電化學(xué)顯微術(shù)構(gòu)建圖形的發(fā)展現(xiàn)狀以及單個生物分子的檢測進(jìn)行了綜述。 第一章我們將原子力顯微鏡中的“蘸筆式”納米刻飾技術(shù)(Dip-Pennanolithography，DPN)的理念運(yùn)用到SECM中，用掃描電化學(xué)顯微術(shù)“蘸筆法”

2、構(gòu)建了辣根過氧化物酶(HRP)微米點(diǎn)。本章中我們首先研究了生物素化的HRP(Bio-HRP)在鉑電極上的吸附及脫吸特性，確定了在Bio-HRP鉑電極上吸附及脫吸的最佳條件。吸附條件：電極在Bio-HRP溶液中浸泡5次，每次4 min；脫吸時間：60 min。在構(gòu)建HRP微米點(diǎn)時，先根據(jù)Bio-HRP在鉑電極上吸附的最佳條件，將Bio-HRP吸附到自制的鉑微米電極上，然后將鉑電極在合適的電位下即-0.3 v(vs.Ag/AgCl)逼近到鏈

3、霉親和素化的基底上方10μm左右，再將Bio-HRP從電極上自然脫吸，通過生物素與親和素的反應(yīng)將其固定到基底上得到微米點(diǎn)，并用SECM對其活性進(jìn)行了表征。同時在工作中為了減小HRP擴(kuò)散所引起的微米點(diǎn)的擴(kuò)大，在UME與基底之間形成一厚度為10μm左右的液膜，減小了分子擴(kuò)散對結(jié)果的影響。 第二章用全內(nèi)反射熒光顯微術(shù)對鼠IgG在單分子水平上進(jìn)行了免疫分析。先將蓋玻片硅烷化，在蓋玻片表面形成環(huán)氧基團(tuán)，然后在蓋玻片上加上鼠IgG溶液進(jìn)行孵

4、育，使鼠IgG分子固定在玻片表面，加上BSA溶液將玻片未固定鼠IgG分子的地方封閉，然后將Alexa488標(biāo)記的羊抗鼠IgG(H+L)溶液滴加在有鼠IgG溶液的地方進(jìn)行孵育，這樣就在有鼠IgG分子的地方接上了Alexa488標(biāo)記的羊抗鼠IgG(H+L)分子，孵育完后將多余的Alexa488標(biāo)記的羊抗鼠IgG(H+L)分子洗掉，用全內(nèi)反射熒光顯微鏡檢測Alexa488標(biāo)記的羊抗鼠IgG(H+L)分子，通過檢測到的Alexa488標(biāo)記的羊抗