木薯葉多酚氧化酶的分離純化及其應(yīng)用.pdf

1、本文以木薯葉為研究對(duì)象,進(jìn)行了木薯葉多酚氧化酶的提取、純化、固定化及其在降解含苯環(huán)的水體污染物方面的研究。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:
　　木薯葉多酚氧化酶的提取方法為:比較勻漿浸提法、丙酮粉法、輔助浸提法對(duì)木薯葉多酚氧化酶提取的影響,得出最佳的提取方案是先用丙酮粉法進(jìn)行前處理,然后用輔助浸提法提取多酚氧化酶。最佳提取條件是:用pH6.6的磷酸緩沖液以1:6的料液比浸提6小時(shí)。
　　木薯葉多酚氧化酶的純化方案為:多酚氧化酶經(jīng)50

2、％~80%濃度硫酸銨分級(jí)沉淀,分子截留量為8～14 KDa的透析袋透析除鹽、反向透析濃縮后,用Sephadex G-75 superfine凝膠過(guò)濾層析和DEAE Sephadex A50離子交換層析后得到純多酚氧化酶,經(jīng)SDS PAGE檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其相對(duì)分子質(zhì)量為66 KDa。
　　木薯葉多酚氧化酶固定化的最佳條件為:分別合成MCM-41、SBA-15、SBA-16三種介孔二氧化硅材料,得出對(duì)木薯葉多酚氧化酶進(jìn)行固定化得出最佳固定化

3、條件為:每10 mg SBA-16的載酶量為3mL(酶濃度500 mg/mL),在pH7.2的PBS中固定3 h,然后在0.3%的戊二醛中交聯(lián)2h。經(jīng)過(guò)固定化后多酚氧化酶的溫度穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性、和操作穩(wěn)定性都有了顯著提升。Km值由原來(lái)的Km1=0.13247mol/L變成固定化后的Km2=0.12135mol/L,底物親和力有所降低。
　　用SBA-16固定化的多酚氧化酶10 h對(duì)鄰苯二酚的催化降解率為99.36%;對(duì)剛果紅2