球孢白僵菌不同菌株分生孢子耐熱力及相關(guān)孢壁蛋白分析.pdf

1、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)制劑已被廣泛的應(yīng)用于農(nóng)林害蟲生物防治。環(huán)境溫度是影響生防真菌孢子制劑貯存和應(yīng)用的關(guān)鍵因素之一。為了篩選獲得適應(yīng)我國南方夏季高溫的生防潛力菌株，并進一步研究抗逆性生物學的分子機制，本研究對不同地理和寄主來源的12株球孢白僵菌分生孢子耐熱性定量評價，并對一種孢壁類疏水蛋白CWP15進行了基因的全序列測定。主要內(nèi)容和結(jié)果分述如下： 孢子耐熱生物學測定研究以48℃為脅迫溫度的分生孢子耐熱

2、力測定方法和定量評價體系中引入了一個全新的變量—殘存指數(shù)I<,s>，即孢子在48℃脅迫下不同時刻的殘存活孢率與未經(jīng)脅迫的孢子萌發(fā)率的比值。對于原產(chǎn)地和寄主不同的12株球孢白僵菌的分生孢子進行48℃下熱脅迫，其殘存指數(shù)隨脅迫時間的衰變過程很好地擬合邏輯斯蒂模型(r<'2>≥0．97，P<0．01)。殘存指數(shù)隨時間衰變過程明顯表現(xiàn)為緩慢下降，快速下降和平緩下降三個部分。對所有供試菌株而言，孢子殘存指數(shù)均隨著48℃熱脅迫時間的延長而降低，且存

3、活率的衰變速度因菌株不同而異。12株球孢白僵菌對48℃熱脅迫的LT<,50>平均為12．6 min(6．7～21-2 min，)，其中有四株菌的LT<,50>低于10 min，而多數(shù)菌株的LT<,50>介于10～20 min。 FAE蛋白分析推測分生孢子孢壁類疏水蛋白即可甲酸抽提的(formic-acid-extractable，縮寫FAE)蛋白與孢子耐熱性生物學性狀有關(guān)。本研究采用Tris-Tricine緩沖體系的SDS-PA

4、GE凝膠電泳分析，對12株球孢白僵菌孢壁類疏水蛋白進行了電泳條帶分析。結(jié)果顯示，同一菌種內(nèi)FAE蛋白組分無明顯變化，但各菌株間FAE蛋白條帶略有不同，其中15．0和17．5kDa蛋白屬于組成型表達，而12．0kDa條帶在某些菌株中未見。 孢壁類疏水蛋白CWP15基因序列測定與分析孢壁類疏水蛋白CWP15是本實驗室發(fā)現(xiàn)并推測與孢子耐熱性狀有關(guān)的一個全新的蛋白。本研究選擇12株球孢白僵菌的孢壁類疏水蛋白CWP15作為研究對象，對其基

5、因序列進行測定及比對分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其氨基酸序列含有高度保守的序列HNDRVVGAWDODVKIV，同時存在多樣性，可分為CWP15a和CWP15b兩類。其中，來自云南的三個菌株Bb0101、Bb0103和Bb0104分屬于不同的兩類，說明同一地理來源的菌株間也存在多樣性。這意味著CWP15基因有可能作為球孢白僵菌系統(tǒng)進化研究的新的分子標記。 綜上所述，本研究結(jié)果表明，球孢白僵菌分生孢子耐熱力的種類變異較大，且存活率的衰變速度因