小分子化合物處理對川金絲猴-山羊異種核移植胚胎體外發(fā)育的影響.pdf

1、川金絲猴被列為國家一級瀕危野生保護動物，面臨現(xiàn)存數(shù)目的極劇下滑，如何優(yōu)化其在生長、發(fā)育及生殖繁育方面的問題引起了研究學者廣泛關注。由于物種珍貴且數(shù)量稀少，同種核移植受到一定限制，采用異種核移植的方法成功避免了這一問題。異種核移植的成功受核移植操作過程、受體細胞和供體細胞類型的影響，尤其是供體細胞重編程的能力，所以供體細胞的處理對異種核移植的成功起關鍵作用。隨著體細胞多潛能性研究的發(fā)展，運用小分子化合物誘導處理對供體細胞進行表觀遺傳學修飾

2、，提高重編程效率獲得了廣泛應用。
　　本研究對川金絲猴來源的供體細胞用小分子化合物處理，以山羊卵母細胞為受體進行異種核移植，探究處理前后對異種核移植胚胎體外發(fā)育的影響。本研究結果如下:
　　(1)研究材料為川金絲猴耳緣皮膚組織，采用組織塊貼壁法分離獲得耳緣皮膚成纖維細胞。用合適濃度的小分子化合物對獲得的細胞進行誘導處理，從細胞形態(tài)、增殖能力、標志性基因的表達水平進行檢測。結果發(fā)現(xiàn):分離得到川金絲猴耳緣皮膚成纖維細胞，經(jīng)過數(shù)次

3、傳代培養(yǎng)仍能保持較高的活力;PCR顯示有胚外內胚層標志基因Sall4和Gata6的表達;Q-PCR定量發(fā)現(xiàn)Gata6和Sall4的表達量升高。Gata6在2d、4d、12d的表達量升高顯著(p＜0.05)，尤其第6d和14d表達量升高極顯著(p＜0.01);Sall4表達量的升高更為明顯，在第2d、4d、10d表達量升高顯著(p＜0.05)，尤其第6d、8d、12d和14d表達量升高極顯著(p＜0.01)。
　　(2)兩者融合形成

4、重組異構胚，激活后培養(yǎng)觀察胚胎的發(fā)育情況并統(tǒng)計各時期數(shù)量，Q-PCR和免疫熒光化學染色檢測早期發(fā)育相關基因的表達，實驗發(fā)現(xiàn):形成的川金絲猴-山羊重組異構胚在發(fā)育各個階段處理組和對照組重構胚數(shù)量無顯著差異(P＞0.05);相關標志性基因檢測發(fā)現(xiàn):在處理組中Oct4、Prrx1的表達量顯著增加(p＜0.05)，且Sox2、Telemeras的表達量極顯著增加(p＜0.01)，相反Nanog的表達量降低但差異不顯著(p＞0.05);免疫熒光染