小分子化合物和hiPS培養(yǎng)液對(duì)豬體細(xì)胞核移植胚胎的研究.pdf

1、目前體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)克隆豬在農(nóng)業(yè)和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域都有著廣泛的應(yīng)用前景。但由于體細(xì)胞核移植效率一直很低，限制了克隆豬的應(yīng)用。影響克隆效率的原因有很多，例如表觀遺傳程序的不完全表達(dá)、不適的培養(yǎng)環(huán)境及染色體的異?；?。本文首次研究了羅米魯曲對(duì)豬體細(xì)胞核移植胚胎后期發(fā)育能力的影響，并首次將豬體細(xì)胞核移植早期囊胚在人誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)，并分析其結(jié)果。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴利用不同濃度的羅米魯曲處理豬體細(xì)胞克隆胚胎24小時(shí)，尋

2、找最適合濃度，隨后用最適濃度處理不同時(shí)間，確定最佳時(shí)間和最佳濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在不同的處理濃度下（0 nM，50 nM，100 nM，200 nM），其中100 nM的囊胚率顯著優(yōu)于對(duì)照組和其他處理組(9.8％，12.3%，18.3%，5.2%，P<0.05)。用最優(yōu)濃度100nM的羅米魯曲進(jìn)行不同時(shí)間的處理時(shí)（0h，12h，24h，48h），結(jié)果顯示，24小時(shí)的囊胚率優(yōu)于對(duì)照組及其他處理組(8.0%，4.7%，13.7%，11.1%)

3、。最后將100nM羅米魯曲處理24小時(shí)的豬體細(xì)胞核移植胚胎移植到兩頭代孕母豬體內(nèi)，其中一頭懷孕。以上結(jié)果表明，羅米魯曲對(duì)豬體細(xì)胞核移植胚胎體外發(fā)育起到促進(jìn)作用。⑵研究?jī)煞N不同體外培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)的囊胚的質(zhì)量，分別命名為one-step和two-step培養(yǎng)系統(tǒng)。在one-step培養(yǎng)系統(tǒng)中，豬核移植囊胚在NCSU-37培養(yǎng)液中培養(yǎng)7天，在第5天更換1次培養(yǎng)液。在two-step培養(yǎng)系統(tǒng)中，豬核移植胚胎在NCSU-37培養(yǎng)液培養(yǎng)5天，之后更換

4、到人誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)2天（共7天）。隨后，檢測(cè)兩種體外培養(yǎng)系統(tǒng)中培養(yǎng)的豬囊胚的形態(tài)和質(zhì)量。囊胚在one-step和two-step培養(yǎng)體系中，孵化的直徑、周長(zhǎng)及面積的比率存在顯著性差異(3.01±0.20 versus1.59±0.19，P<0.01;3.30±0.06 versus1.38±0.18，P<0.01;10.23±0.33 versus1.12±0.37，P<0.01)。two-step培養(yǎng)系統(tǒng)中的囊胚形態(tài)上顯