食蟹猴—豬異種體細(xì)胞核移植初步研究.pdf

1、體細(xì)胞異種核移植能夠解決卵母細(xì)胞資源稀缺問題，是治療性克隆的潛在有力技術(shù)。但目前相對于同種核移植胚胎與體外受精胚胎，異種核移植技術(shù)效率低下是當(dāng)前亟待解決的問題。本研究的目的在于為食蟹猴-豬異種核移植胚胎選擇有效的融合/激活策略和培養(yǎng)液。本研究的試驗(yàn)方法和結(jié)果簡述如下：
　　 1.為了解食蟹猴-豬異種體細(xì)胞核移植胚胎的發(fā)育能力，試驗(yàn)以食蟹猴和豬耳部成纖維細(xì)胞為供體，豬MII期去核卵母細(xì)胞為受體，構(gòu)建核移植胚胎，重構(gòu)胚經(jīng)激活后于PZ

2、M-3培養(yǎng)液中培養(yǎng)。結(jié)果表明：食蟹猴-豬異種核移植胚胎與豬同種核移植胚胎的分裂率沒有顯著差異(70.0 vs.76.6％，p>0.05)，但食蟹猴一豬異種核移植胚胎不能發(fā)育超過16-細(xì)胞期。通過食蟹猴和豬特異引物確認(rèn)食蟹猴.豬異種核移植胚胎和豬同種核移植胚胎的遺傳物質(zhì)均來源于他們各自的供體細(xì)胞。
　　 2.試驗(yàn)比較了食蟹猴-豬異種核移植、豬同種核移植以及豬孤雌激活胚胎在融合或激活后1h染色質(zhì)狀態(tài)的變化。食蟹猴-豬異種核移植胚胎融

3、合后1h的染色體早熟凝集率較豬同種核移植胚胎和豬孤雌激活胚胎顯著降低，說明異種核移植胚胎的核重塑不完全。通過使用無鈣離子融合液防止卵母細(xì)胞預(yù)先激活的策略能夠顯著提高染色體早熟凝集的比例。但無論是融合同時(shí)(后)激活，無鈣離子液的使用均未能使食蟹猴異種核移植胚胎發(fā)育到囊胚期。
　　 3.HECM-10是猴類胚胎常用的培養(yǎng)基，為研究這兩種培養(yǎng)液對異種核移植胚胎發(fā)育的影響，試驗(yàn)將融合后的食蟹猴.豬異種核移植胚胎分別于PZM-3、HECM