RANK信號(hào)通路分子在衰老卵巢中的表達(dá)分析.pdf

1、第一部分:
　　目的:
　　通過檢測RANK信號(hào)通路分子在衰老卵巢的表達(dá)情況,為進(jìn)一步揭示RANK信號(hào)通路與卵巢衰老的相關(guān)性奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1、HE染色檢測:收集8周和12個(gè)月的ICR小鼠卵巢,進(jìn)行冰凍切片、HE染色檢測小鼠卵巢中原始卵泡、初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡和成熟卵泡的數(shù)目。
　　2、RT-PCR檢測:收集8周和12個(gè)月的ICR小鼠卵巢,分別提取卵巢總RNA,RT-PCR檢測RANK信號(hào)通路相關(guān)

2、分子RANK、RANKL和AIRE在卵巢中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1、卵泡統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:8周的小鼠卵巢內(nèi)原始卵泡數(shù)目為66±17個(gè),初級(jí)卵泡數(shù)目為50±7個(gè),次級(jí)卵泡數(shù)目為36±13個(gè),成熟卵泡數(shù)目為6±2個(gè);12個(gè)月的小鼠卵巢內(nèi)原始卵泡數(shù)目為13±3個(gè),初級(jí)卵泡數(shù)目為2±1個(gè),次級(jí)卵泡數(shù)目為2±1個(gè),成熟卵泡數(shù)目為0±0個(gè)。
　　2、RT-PCR結(jié)果顯示:8周的小鼠卵巢表達(dá)RANK信號(hào)通路相關(guān)分子RANK、RA

3、NKL和AIRE;而12個(gè)月的小鼠卵巢不表達(dá)RANK信號(hào)通路相關(guān)分子RANK、RANKL和AIRE。
　　結(jié)論:
　　衰老卵巢中各級(jí)卵泡數(shù)目明顯減少;衰老卵巢不表達(dá) RANK信號(hào)通路相關(guān)分子RANK、RANKL和AIRE。
　　第二部分:
　　目的:
　　利用慢病毒將基因特異性shRNA慢病毒質(zhì)粒導(dǎo)入小鼠2-細(xì)胞期胚胎,為建立基因knockdown小鼠模型奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1、體外培養(yǎng)

4、:收集小鼠2-細(xì)胞期胚胎,分為兩組:一組直接培養(yǎng),一組去除胚胎透明帶后培養(yǎng)。觀察小鼠2-細(xì)胞期胚胎和去透明帶的小鼠2-細(xì)胞期胚胎體外發(fā)育情況。
　　2、慢病毒感染:收集小鼠2-細(xì)胞期胚胎,去除胚胎透明帶。通過慢病毒感染的方式將基因特異性shRNA慢病毒質(zhì)粒導(dǎo)入小鼠2-細(xì)胞期胚胎。
　　結(jié)果:
　　1、小鼠2-細(xì)胞期胚胎經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)育至囊胚階段。
　　2、去透明帶的小鼠2-細(xì)胞期胚胎經(jīng)體外培養(yǎng)發(fā)育至囊胚階段。