緩激肽受體介導(dǎo)的NO信號(hào)通路在卵巢癌發(fā)生中的作用.pdf

1、目的:卵巢惡性腫瘤是女性生殖器官常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，由于卵巢位于盆腔深部，早期病變不易發(fā)現(xiàn)，晚期病例也缺乏有效的治療手段，因此卵巢惡性腫瘤致死率居?jì)D科惡性腫瘤首位，已成為嚴(yán)重威脅婦女生命和健康的主要腫瘤。卵巢癌的組織類(lèi)型繁多，其中上皮性卵巢癌占卵巢惡性腫瘤的85～90％，其發(fā)病隱匿，早期無(wú)癥狀，發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已是晚期，這使得該腫瘤的早診早治顯得異常困難。
　　對(duì)于卵巢癌的治療，適當(dāng)?shù)氖中g(shù)配合有效化療可大大提高病人的存活率，其中上皮

2、性卵巢癌對(duì)化療藥物較敏感。其傳統(tǒng)的化療方法是紫杉醇加鉑類(lèi)，但是多數(shù)患者停藥一段時(shí)間后會(huì)復(fù)發(fā)，這可能和卵巢癌的發(fā)病機(jī)制尚不清楚和腫瘤耐藥有關(guān)。
　　緩激肽(BK)是機(jī)體炎癥時(shí)釋放的一種血管活性肽，通過(guò)和細(xì)胞膜上的B1受體和B2受體結(jié)合而起效。對(duì)卵巢癌、胃癌和肝癌等多種病人的胸腹腔滲液檢查均發(fā)現(xiàn)高濃度的BK水平，對(duì)其受體的研究發(fā)現(xiàn)，B1受體和B2受體單獨(dú)或同時(shí)在人類(lèi)多種腫瘤細(xì)胞呈高表達(dá)。這些研究提示，B1R、B2R或二者均可參與腫瘤的

3、增殖。但BK受體亞型在卵巢癌組織的表達(dá)尚未有一致報(bào)道。
　　在本部分研究中，我們首先就上皮性卵巢癌患者和卵巢良性腫瘤患者經(jīng)手術(shù)切除的腫塊組織中BK受體亞型及其下游的主要信號(hào)分子NO產(chǎn)生的酶eNOS和iNOS的表達(dá)進(jìn)行了比較研究。在此基礎(chǔ)上，觀察了B2受體的特異性拮抗劑HOE-140單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用阿霉素(DOX)對(duì)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3的影響及可能的作用機(jī)制。該研究有望找到更好的腫瘤靶位，從而改善卵巢癌患者的生存質(zhì)量。
　　方

4、法:
　　1.卵巢癌組織中緩激肽B1受體、B2受體及eEOS、iNOS的表達(dá)選取臨床確診的卵巢癌患者及卵巢上皮性良性腫瘤患者各20例。年齡在35～55歲之間。無(wú)高血壓、糖尿病等內(nèi)科疾病及遺傳病病史。
　　采用患者手術(shù)切除后經(jīng)病理確診為卵巢上皮性良性腫瘤及上皮性卵巢癌患者的卵巢標(biāo)本，免疫組化法檢測(cè)卵巢癌組織中B1、B2及eNOS及iNOS的表達(dá)。
　　2.血清中NO活性測(cè)定在治療前抽取初步診斷為卵巢癌的患者靜脈血液5 m

5、l20例，（其中15例術(shù)后病理證實(shí)為上皮性卵巢癌），另抽取正常人靜脈血液5 ml20例，離心，分離上清液，采用NO試劑盒測(cè)定血液中NO含量。
　　3.DOX和HOE-140單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)SKOV3細(xì)胞增值的影響采用MTT法檢測(cè)不同濃度的阿霉素（3，10，30，100和300μmol/L）或HOE-140(0.01，0.1，1，10和100μmol/L)和SKOV3作用24小時(shí)后細(xì)胞的存活情況。在此基礎(chǔ)上，比較二者聯(lián)合用藥（DOX

6、10μmol/L+HOE14010μmol/L）和分別單獨(dú)應(yīng)用相同劑量的DOX或HOE-140對(duì)SKOV3的細(xì)胞毒作用。
　　4.DOX和HOE-140單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)SKOV3細(xì)胞凋亡的影響將SKOV3細(xì)胞分別與DOX10μmol/L、HOE-14010μmol/L或聯(lián)合應(yīng)用DOX10μmol/L+HOE-14010μmol/L作用24 h，采用原位末端標(biāo)記技術(shù)觀察（TUNEL試劑盒）細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　

7、1.卵巢組織標(biāo)本B1、B2受體、eEOS和iNOS的表達(dá)對(duì)臨床上確診為卵巢癌患者和卵巢良性腫瘤患者手術(shù)后切取的卵巢組織進(jìn)行免疫組化結(jié)果顯示，B1受體在良性卵巢組織中幾乎不表達(dá)，B2受體在良性卵巢組織中有表達(dá)，eNOS在良性卵巢組織中有少量表達(dá)，iNOS無(wú)明顯表達(dá)，和卵巢良性腫瘤患者的卵巢組織相比，卵巢癌組織細(xì)胞中B1受體、B2受體、eNOS及iNOS均呈高表達(dá)。
　　2.血清中NO含量測(cè)定對(duì)所采集血清中NO含量測(cè)定結(jié)果表明，卵巢癌

8、患者血清中NO含量顯著高于正常人血清中的含量（P＜0.01）。
　　3.對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖的影響MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，將不同濃度的DOX（3，10，30，100和300μmol/L）或HOE-140(0.01，0.1，1，10和100μmol/L)與SKOV3共同孵育24小時(shí)后，二者均對(duì)SKOV3細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用。其中HOE-14010μmol/L的抑制率是12.7％，而DOX10μmol/L的抑制率為26.8％。二者

9、聯(lián)合應(yīng)用的抑制率為37.5％，其聯(lián)合應(yīng)用的對(duì)SOV3細(xì)胞的抑制作用明顯強(qiáng)于二者單獨(dú)應(yīng)用（P均＜0.01）。
　　4.對(duì)SKOV3細(xì)胞凋亡的影響Tunnel染色顯示，單獨(dú)應(yīng)用10μmol/L HOE-140或DOX處理SKOV3細(xì)胞24小時(shí)均可誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞的凋亡，兩者聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞的凋亡作用明顯強(qiáng)于單獨(dú)應(yīng)用。
　　結(jié)論:
　　1.上皮性卵巢癌患者血清中NO含量較正常人為高，其卵巢組織中B1、B2、eNO