異常Notch3通路在人卵巢癌發(fā)病機制中的作用研究.pdf

1、本文對異常Notch3通路在人卵巢癌發(fā)病機制中的作用進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　 第一部分：Jagged-1在人卵巢癌中被Notch3和WNT/β-catenin 途徑調控。卵巢癌是一種惡性度高，侵襲性強的惡性腫瘤。我們在之前的研究工作中，已經(jīng)證實了Notch3在人卵巢漿液癌中擴增和表達上調，Notch 通路活性高低對于卵巢癌耐藥性亦有十分重要的意義。在Notch3的眾多配體中，Jagged-1在卵巢癌組織中表達最高，

2、而且Jagged-1與Notch3表達水平成正相關性。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)了Jagged-1表達受Notch3 信號調控。沉默Notch3或與其互相作用的轉錄因子RBPjk，都能抑制Jagged-1在卵巢癌細胞中的表達。在人類卵巢上皮細胞中外源性表達Notch3 胞內段N3ICD或轉基因小鼠誘導過表達人Notch3，均可以上調Jagged-1表達。除此之外，抑制WNT/β-catenin 信號，也使Jagged-1表達降低。同時下調Not

3、ch3和WNT 信號對抑制癌細胞增殖和降低Jagged-1表達作用均明顯大于單一途徑抑制。綜上，在卵巢癌中，配體Jagged-1與受體Notch3 其存在正反饋的調節(jié)關系，Jagged-1 也同時被WNT/β-catenin 途徑調控。上述兩種配體調控途徑都能影響Notch3 信號途徑，導致卵巢腫瘤的發(fā)生。
　　 第二部分：運用ChIP-chip芯片技術研究Notch3在人卵巢癌細胞中的調控機制。Notch 通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展中

4、有著非常重要的作用，闡明Notch 信號通路調控機制是了解此通路具體作用的基礎。應用ChIP-on-chip 技術，我們發(fā)現(xiàn)了一系列基因啟動子區(qū)域均結合有CSL/N3ICD 轉錄因子復合物。運用生物信息學技術分析后，發(fā)現(xiàn)一種新CSL 可結合序列“GTTGCCAT”。接下來的研究中，我們選擇一些可同時被γ-分泌酶抑制劑和Notch3 shRNA 抑制的基因作為Notch3 通路下游候選基因。在這些基因中，HURP 編碼產(chǎn)物由于參與細胞有絲

5、分裂過程，視為代表。當Notch 通路抑制時，實時定量PCR和蛋白免疫印跡分別檢測其mRNA和蛋白表達量均降低。凝膠電泳遷移率實驗（EMSA）表明RBPjk 可以與其啟動子區(qū)域結合。啟動子熒光素實驗表明無論是經(jīng)典的CSL 結合序列和新發(fā)現(xiàn)的結合序列均能影響基因表達。沉默HURP后，可使細胞停滯于G2/M 期從而抑制細胞增殖和裸鼠移植瘤成瘤性。外源表達HURP 可以部分削弱γ-分泌酶抑制劑或Notch3 shRNA 對于細胞增殖的抑制作用