外周血單個核細胞在Sonichedgehog信號通路中的活化表達.pdf

1、目的：
　　探討 Sonic hedgehog(Shh)信號通路阻斷抗體(ShhAb)對外周血單個核細胞（PBMCs)抗胃癌MC細胞作用的表達及影響。
　　方法：
　　復蘇GES-1細胞，待細胞生長至70～80％進行誘導，加入不含血清和雙抗的DMEM5ml及稀釋為2×10-1mol/L的MNNG，避光培養(yǎng)24h，更換含血清及雙抗的DMEM，7d左右不貼壁細胞大量脫落，殘留的貼壁細胞繼續(xù)培養(yǎng)，長滿后消化并傳代，此時的細胞

2、為MC細胞，并與Ficoll法對正常人（體檢各項指標均正常）PBMCs進行密度梯度分離建立共培養(yǎng)體系；于共培養(yǎng)體系中加入Shh Ab，RT-PCR觀察Shh、Gli-1基因的表達并進行半定量數(shù)據(jù)分析；在共培養(yǎng)體系中加入Shh阻斷抗體，流式細胞術檢測CD3、CD5、CD69分子表達。
　　結果：
　　GES-1細胞的形態(tài)發(fā)生顯著變化，顯微鏡下呈大小不一的多角形、多核形細胞，胞體變大，緊密排列并呈團塊狀生長,RT-PCR：Gli

3、-1mRNA在MC+ShhAb細胞組值為0.2845±0.0025，低于MC細胞組的0.5167±0.0109（P＜0.05），GES-1細胞組基因表達陰性；流式細胞：GES-1細胞組CD3+細胞數(shù)較少，MNNG誘導組和MC細胞組CD3+細胞數(shù)顯著增多，GES-1細胞組和MNNG誘導組均未見CD69+細胞， MC細胞組CD69+細胞數(shù)顯著增多，GES-1細胞組、MNNG誘導組和MC細胞組CD5+細胞數(shù)均處于低水平，ShhAb增強PBMC