蘭茵鳳揚(yáng)化濁解毒方對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠TNF-α、TLR-,4-及NF-κBp65表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過觀察蘭茵鳳揚(yáng)化濁解毒方對(duì)瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠一般情況、疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分、血清腫瘤壞死因子-α(tumornecrosis factor-α，TNF-α,)含量、結(jié)腸組織中Toll樣受體4(Toll-like receptor4,TLR4)及核轉(zhuǎn)錄因子κBp65(Nucl-ear transcription factor-Kappa Bp65，NF-kBp65)蛋白表達(dá)的影響，并

2、與柳氮磺胺吡啶（sulfasalazine tablets, SPAP）進(jìn)行比較，以期從實(shí)驗(yàn)角度進(jìn)一步證實(shí)該方對(duì)UC的療效及作用機(jī)理，探索和研究新的治療方法和行之有效的藥物，旨在為臨床提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，拓寬UC的治療領(lǐng)域。
　　 方法：將60只8周齡健康雄性wistar大鼠隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為正常組(NG)、模型組(MG)、中藥大劑量組(HDG)、中藥小劑量組(LDG)和SASP組(SPAP)。采用2，4，6-三硝基苯磺

3、酸(trini-trobenzenesulfonic acid，TNBs)/乙醇聯(lián)合造模法（TNBs/乙醇法）誘導(dǎo)大鼠UC動(dòng)物模型(MK)，于造模成功3d后分別對(duì)HDG、LDG及SASP進(jìn)行灌胃治療。NG予等量生理鹽水灌胃。每天對(duì)各組大鼠進(jìn)行DAI評(píng)分。灌胃治療第14d后處死各組大鼠，每只大鼠取血4ml做TNF-α含量的檢測(cè)，結(jié)腸標(biāo)本采集后立即固定于10％的福爾馬林溶液中24小時(shí)以上，梯度酒精脫水，石蠟包埋，常規(guī)切片(厚度3um)，HE

4、染色，顯微鏡下觀察，部分切片用于TLR4和NF-kBp65免疫組化分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.各組大鼠一般情況與DAI評(píng)分
　　 與NG比較，造模后各組大鼠精神不振，活動(dòng)減少，拱背，被毛松散，毛色偏黃無光澤，食量下降，拉稀便或粘液血便，其中MG大鼠一般情況最差；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組大鼠一般情況均有不同程度的好轉(zhuǎn)，其中MG大鼠一般狀況恢復(fù)最差，HDG大鼠一般狀況恢復(fù)并接近于NG，SPAP和LDG大鼠一般狀況介于HD

5、G和MG之間，兩組無明顯區(qū)別。在DAI評(píng)分方面，MG(2.56±0.23)、HDG(0.68±0.13)、LDG(1.08±0.11)和SASP(1.09±0.10)與NG比較p＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HDG(0.68±0.13)與LDG(1.08±0.11)和SASP(1.09±0.10)比較p＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LDG(1.08±0.11)與SPAP(1.09±0.10)比較p＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.結(jié)

6、腸粘膜大體觀與組織病理學(xué)觀察
　　 肉眼觀察大鼠結(jié)腸粘膜MG最差，HDG組恢復(fù)接近NG，SPAP和LDG結(jié)腸粘膜狀況介于HDG和MG之間，兩組無明顯區(qū)別；在組織病理學(xué)方面：與NG比較，造模后各組大鼠結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞完整度、腺體結(jié)構(gòu)、杯狀細(xì)胞等方面均有所改變，可見不同程度的充血、水腫、糜爛及潰瘍?cè)钚纬?，以MG大鼠表現(xiàn)最為明顯；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各治療組大鼠結(jié)腸粘膜均有不同程度的恢復(fù)，其中HDG大鼠結(jié)腸粘膜接近NG，恢復(fù)程度做好。MG仍可

7、見組織水腫和充血、炎性細(xì)胞浸潤及潰瘍存在，恢復(fù)較差。SPAP和LDG結(jié)腸粘膜恢復(fù)介于HDG和MG之間。
　　 3.蘭茵鳳揚(yáng)化濁解毒方對(duì)UC大鼠血清TNF-α含量的影響
　　 各治療組血清TNF-α含量與MG（1.10±0.29）比較p＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HDG（0.75±0.10）與SPAP（0.90±0.07）、LDG（0.88±0.09）比較p＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LDG（0.88±0.09）與SPAP（0

8、.90±0.07）比較p＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.蘭茵鳳揚(yáng)化濁解毒方對(duì)UC大鼠NF-kBp65及TLR4表達(dá)的影響：
　　 各組NF-kBp65及TLR4表達(dá)與MG（194.2±12.4、81.6±8.6）比較p＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HDG（89.0±10.7、7.6±2.4）與SPAP（103.5±9.47、36.4±7.7）、LDG（105.0±10.2、46.0±8.9）比較p＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

9、義；LDG與SPAP比較p＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.TNBs/乙醇法可以成功誘導(dǎo)UC大鼠模型，在臨床表現(xiàn)及病理學(xué)表現(xiàn)方面與人UC有很高的相似程度。該模型方法簡(jiǎn)單，價(jià)格適中，重復(fù)性好。
　　 2.蘭茵鳳揚(yáng)化濁解毒方能較快緩解UC大鼠腹瀉、粘液便、膿血便等臨床表現(xiàn)，并且能較好的控制組織充血、水腫，促進(jìn)組織糜爛及潰瘍的愈合。且其療效與中藥劑量大小有關(guān)。
　　 3.蘭茵鳳揚(yáng)化濁解毒方治療