鈦膠RP-HPLC法在水溶性維生素分析中的研究.pdf

1、隨著高效液相色譜（HPLC）在分析領(lǐng)域的應(yīng)用范圍越來(lái)越廣，其色譜填料的發(fā)展也日益引起國(guó)內(nèi)外研究者的關(guān)注。目前，HPLC普遍使用的是硅膠色譜填料，但由于其具有適用的pH值范圍窄（pH值為3-10）及對(duì)堿性化合物不可逆吸附等缺點(diǎn)，相較而言，鈦膠色譜填料具有很好的化學(xué)穩(wěn)定性、機(jī)械穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。例如，鈦膠在pH值1-14范圍都能夠穩(wěn)定存在；對(duì)堿性化合物具有很好的分離效果；可與含羥基、磷酸、羧酸等基團(tuán)的化合物進(jìn)行結(jié)合；且鈦膠色譜柱在升高溫度時(shí)

2、具有較低的柱壓，有利于化合物的分離分析。由于這些優(yōu)于硅膠色譜柱的特點(diǎn)，近年來(lái)鈦膠作為色譜填料，吸引了眾多的國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其進(jìn)行研究。
　　維生素對(duì)于維護(hù)人體健康、預(yù)防及治療多種疾病都有著重要的作用，雖然糧食、水果和蔬菜等食物中含有維生素，但目前出現(xiàn)了越來(lái)越多補(bǔ)充維生素的食品及保健品，因此對(duì)于維生素含量的分析與測(cè)定具有重要意義。鈦膠反相色譜柱對(duì)維生素的分析未見(jiàn)報(bào)道，本文研究了反相鈦膠色譜柱在分析水溶性維生素方面的應(yīng)用。
　　本課

3、題的內(nèi)容包括三部分：
　?。?）建立了鈦膠反相色譜柱對(duì)維生素B1的測(cè)定方法。研究了維生素B1的保留行為與甲醇含量、柱溫和流速的關(guān)系，得出最優(yōu)色譜條件：檢測(cè)波長(zhǎng)265nm，磷酸緩沖鹽pH值7.0，濃度5.0mmol/L，甲醇65％，柱溫30℃，流速1.0mL/min。線性范圍為0.083-125μg/mL（R2=0.9998）；檢出限為0.025μg/mL；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=8）為0.56%；加標(biāo)回收率范圍為95.46%-105.4

4、0%。
　?。?）建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定維生素B2和維生素B5含量的檢測(cè)方法。研究了兩種維生素的保留行為與磷酸緩沖鹽濃度、柱溫和流速的關(guān)系，得出最優(yōu)色譜條件：在270nm檢測(cè)維生素B2，在210nm檢測(cè)維生素B5，磷酸緩沖鹽pH值2.5，濃度80mmol/L，柱溫50℃，流速0.8mL/min。分析了兩種維生素保留的熱力學(xué)參數(shù)-焓、熵和吉布斯自由能。維生素B2和維生素B5線性范圍分別為1.0-50.0μg/mL（R2=0.9

5、999）和3.0-150.0μg/mL（R2=0.9998）；維生素B2和維生素B5的檢出限分別為0.300μg/mL和0.900μg/mL；兩種物質(zhì)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于0.22%；加標(biāo)回收率范圍為94.55%-104.06%。方法的精密度和準(zhǔn)確度均可滿足HPLC法的測(cè)定要求。
　　（3）建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定五種維生素：生物素（維生素B7）、葉酸（維生素B9）、鈷胺素（維生素B12）、煙酸和煙酰胺（統(tǒng)稱維生素PP）含量的檢測(cè)

6、方法。研究了五種維生素的保留行為與磷酸緩沖鹽pH、緩沖鹽濃度、柱溫和流速的關(guān)系，得出最優(yōu)色譜條件：在210nm檢測(cè)生物素和鈷胺素，270nm檢測(cè)煙酸、煙酰胺和葉酸，磷酸緩沖鹽pH值7.0，濃度5.0mmol/L，柱溫50℃，流速0.8mL/min。分析了五種維生素保留的熱力學(xué)參數(shù)-焓、熵和吉布斯自由能。煙酸、生物素、煙酰胺、葉酸和鈷胺素標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好（R2＞0.9990）；煙酸、生物素、煙酰胺、葉酸和鈷胺素的檢出限分別為0.006μg