簡(jiǎn)介：新生兒中四肢先天畸形的發(fā)生率為1500到11000。單獨(dú)發(fā)生的四肢畸形一般不會(huì)危及患者生命，但是嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量。近年各種遺傳性肢端骨骼畸形的致病基因陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，鑒定這些基因并研究其致病機(jī)制，可以為這些疾病的遺傳咨詢奠定基礎(chǔ)，可以豐富發(fā)育生物學(xué)的知識(shí)，從而為更多種遺傳性或非遺傳性骨骼疾病的預(yù)防和治療提供靶點(diǎn)。本文研究集中于常染色體顯性遺傳的肢端骨骼縮短或缺失畸形，包括短指趾畸形和缺指趾畸形。研究對(duì)象為5個(gè)表型不同但發(fā)生機(jī)制相關(guān)的中國(guó)人家系。研究工作分兩部分。第一部分短指趾畸形相關(guān)致病基因突變的研究短指趾畸形BRACHYDACTYLY，BD是指趾骨、掌跖骨發(fā)育異常導(dǎo)致的指趾縮短畸形。本文首先對(duì)以中節(jié)指骨縮短為共同表現(xiàn)的三個(gè)中國(guó)人短指趾畸形家系進(jìn)行了致病基因突變研究研究。其中一個(gè)家系家系2主要表型為C型短指趾畸形BDC伴掌跖角化PALMOPLANTARKERATODERMA，PPK。迄今為止，國(guó)內(nèi)外未曾有過類似表型報(bào)道?；颊?、3和5指中節(jié)指骨縮短，為BDC特征性表現(xiàn)。部分患者生后數(shù)月丌始出現(xiàn)雙側(cè)手掌及足底皮膚彌散的黃色增厚斑塊。我們分別針對(duì)BDC和BDAL的致病基因IHH和GDF5設(shè)計(jì)PCR引物，擴(kuò)增全部外顯子和外顯子內(nèi)含子交界區(qū)，對(duì)患者基因組DNA測(cè)序。結(jié)果在患者中均發(fā)現(xiàn)GDF5基因新突變C146LTGPY487X，在家系正常成員及50名無關(guān)正常個(gè)體中均未檢到該突變。因此，該無義突變是BDC患者中的致病突變。根據(jù)我們目前掌握的家系資料不能確定該家系中全部BDC患者都伴發(fā)PPK，加之又無GDF5基因與皮膚發(fā)育或生理相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道，因此尚不能確定新發(fā)現(xiàn)的GDF5基因突變也是導(dǎo)致患者發(fā)生PPK的遺傳基礎(chǔ)。為了進(jìn)一步檢測(cè)GDF5基因新突變對(duì)蛋白加工分泌的影響及其與PPK發(fā)生的關(guān)系，我們通過基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了初步功能研究。將正常野生型及突變型的GDF5基因克隆并引入CMYC標(biāo)簽序列，利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體系統(tǒng)感染永生化皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞HACAT，建立穩(wěn)定整合細(xì)胞系。應(yīng)用抗CMYC抗體對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞裂解物和培養(yǎng)上清進(jìn)行WESTERN印跡檢測(cè)，證實(shí)突變蛋白不能像野生型蛋白那樣分泌到細(xì)胞外；通過RTPCR對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的角質(zhì)形成細(xì)胞分化標(biāo)記基因IVL和KRT10進(jìn)行MRNA表達(dá)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在整合野生型和突變型GDF5基因的細(xì)胞中表達(dá)水平均降低，突變基因表達(dá)引起的降低更顯著。因此，GDF5基因發(fā)生C146LTGPY487X突變，和已報(bào)道的突變一樣通過蛋白滯留在細(xì)胞內(nèi)這一機(jī)制導(dǎo)致BDC發(fā)生。同時(shí)，突變GDF5基因表達(dá)可能干擾角質(zhì)形成細(xì)胞分化，進(jìn)而導(dǎo)致PPK。GDF5基因C1461TGPY487X突變與PPK發(fā)生相關(guān)的明確結(jié)論有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。另一個(gè)家系家系1為典型B型短指趾畸形BDB。國(guó)外在BDB患者中發(fā)現(xiàn)的R2基因致病突變集中于第8和第9外顯子，國(guó)內(nèi)雖有家系報(bào)道但無R2基因突變研究。我們針對(duì)R2基因內(nèi)已知致BDB的突變區(qū)域設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增患者基因組DNA中目的片段，并將PCR產(chǎn)物片段直接測(cè)序及克隆至T載體測(cè)序，進(jìn)行致病突變檢測(cè)。結(jié)果顯示，患者攜帶一個(gè)雜合移碼突變C13981399INSAPR467FSX523。該突變是國(guó)外已報(bào)道過的BDB家系致病突變。C13981399INSAPR467FSX523可能是BDB中一種頻發(fā)的致病突變。第三個(gè)家系是SYM1。迄今為止，國(guó)內(nèi)尚無中國(guó)人SYM1家系文獻(xiàn)報(bào)道。該家系中患者除中節(jié)指骨縮短外，還表現(xiàn)第1掌骨縮短，第5指遠(yuǎn)節(jié)指骨縮短且指甲發(fā)育不良，絕大多數(shù)近端指骨間關(guān)節(jié)及多數(shù)遠(yuǎn)端指骨間關(guān)節(jié)骨性融合，多處跗骨間關(guān)節(jié)骨性融合；另外患者聽力差，中耳檢查見鼓膜異常。我們選擇BDA1、BDB和BDC的致病基因附近微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行家系成員基因型和連鎖分析，同時(shí)在患者中進(jìn)行以上三個(gè)致病基因全部或部分外顯子測(cè)序分析，均未發(fā)現(xiàn)支持BDA1、BDB和BDC的遺傳證據(jù)。進(jìn)一步對(duì)編碼NOGGIN蛋白的NOG基因進(jìn)行測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)患者均具有一個(gè)錯(cuò)義突變C142GAPE48K。在家系正常成員及50名無關(guān)正常個(gè)體中未檢到該突變；NOG基因第48位密碼子編碼的谷氨酸從魚到人都高度一致，PE48K突變氨基酸極性變化顯著。因此，該突變應(yīng)該是SYM1的致病突變。此外，在一名SYM1伴卵巢功能早衰PREMATUREOVARIANFAILURE，POF的R本患者中，曾有人發(fā)現(xiàn)該突變。我們的發(fā)現(xiàn)不僅明確了C142GAPE48K的致病突變性質(zhì)，同時(shí)還提示該突變可能在亞洲人SYM1中多見?？傊静糠盅芯苛巳齻€(gè)中國(guó)人短指趾相關(guān)畸形家系中致病基因的結(jié)構(gòu)和功能異常。其中在一個(gè)家系中發(fā)現(xiàn)的BDC伴掌跖角化的表型組合及GDF5基因C1461TGPY487X無義突變都是國(guó)際首次。對(duì)野生型和突變GDF5基因進(jìn)行功能研究，首次發(fā)現(xiàn)GDF5基因表達(dá)抑制皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞分化標(biāo)記基因表達(dá)，并且突變基因抑制更顯著。另外兩個(gè)家系中發(fā)現(xiàn)的致病突變?cè)趪?guó)外已有報(bào)道，為中國(guó)人相關(guān)致病突變研究的首報(bào)。第二部分缺指趾畸形致病突變的鑒定缺指趾手足裂畸形ECTRODACTYLYSPLITHSPLITFOOTMALFMATION，SHFM是一種嚴(yán)重影響患者精細(xì)活動(dòng)的先天性肢端畸形，是四肢端骨AUTOPOD中部指軸發(fā)育不全而剩余指趾呈不同模式的融合，典型表現(xiàn)即所謂龍蝦爪中部指軸缺陷、或獨(dú)指橈側(cè)指軸缺陷而無裂隙，第5指趾總不受累。SHFM可以單獨(dú)發(fā)生，或者伴隨其它四肢骨骼畸形，或者伴隨并非四肢骨的其它器官發(fā)育異常。其遺傳方式有多種，已報(bào)道過的有典型的常染色體顯性遺傳、不規(guī)律的常染色體顯性遺傳表現(xiàn)為外顯率降低、表現(xiàn)度變異、常染色體隱性遺傳和X染色體遺傳等。絕大多數(shù)單獨(dú)發(fā)生的SHFM呈幾乎完全外顯的典型常染色體顯性遺傳傳遞。目前已定位的人類SHFM遺傳位點(diǎn)包括SHFM1MIM183600、SITFM2MIM313350、SHFM3MIM600095、SHFM4MIM605289和SHFM5MIM606708，分別位于人染色體7Q21、XQ26、10Q24、3Q27和2Q31。因此，SHFM也是一種表現(xiàn)臨床和遺傳異質(zhì)性的先天性肢端畸形。SHFM3和SHFM4位點(diǎn)上的致病突變已經(jīng)明確，分別是染色體10Q24區(qū)域內(nèi)約05MB的DNA串聯(lián)重復(fù)和染色體3Q27區(qū)域內(nèi)TP63OMIM603273，亦稱P63、TP73L等基因的點(diǎn)突變。國(guó)內(nèi)外尚無在中國(guó)人SHFM家系發(fā)現(xiàn)致病突變的報(bào)道。在本部分研究中，我們利用收集到的兩個(gè)中國(guó)人SHFM家系進(jìn)行了遺傳位點(diǎn)和致病突變研究。首先對(duì)家系中患者進(jìn)行了臨床體檢，拍攝畸形部位外觀照片及X光照片。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究工作包括對(duì)家系成員外周血細(xì)胞進(jìn)行高分辨染色體G顯帶分析；對(duì)SHFM4位點(diǎn)處TP63基因全部外顯子及外顯子內(nèi)含子交界區(qū)設(shè)計(jì)并合成引物，以患者基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物直接測(cè)序；在已知的5個(gè)SHFM位點(diǎn)染色體區(qū)域選擇微衛(wèi)星標(biāo)記，通過PCR擴(kuò)增和聚丙烯酰胺凝膠電泳分析家系成員的基因型和單體型對(duì)家系中患者進(jìn)行染色體10Q243區(qū)域SHFM3位點(diǎn)內(nèi)微衛(wèi)星標(biāo)記多態(tài)片段的測(cè)序分析，比較患者和基因型相同的正常對(duì)照個(gè)體不同等位片段測(cè)序峰高度的差別，借以檢測(cè)DNA重復(fù)。兩個(gè)SHFM家系患者的缺指趾表型及傳遞規(guī)律有所不同。一個(gè)家系家系4患者呈典型而嚴(yán)重的手足裂畸形手為獨(dú)指畸形，足為龍蝦爪畸形，患者表型相似，并呈典型的常染色體顯性遺傳。另一家系家系5患者表型輕重不一，重者呈典型龍蝦爪樣畸形，輕者只有膜性并指或個(gè)別指骨缺失；該家系中患者畸形足重于手，均有手或足的第一指趾的寬大或復(fù)制畸形；雖為常染色體顯性遺傳方式，但有表現(xiàn)度變異。高分辨染色體G顯帶分析結(jié)果顯示兩個(gè)家系患者均未見染色體數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)畸變；對(duì)TP63基因進(jìn)行測(cè)序亦都未發(fā)現(xiàn)突變。微衛(wèi)星標(biāo)記基因型分析結(jié)果提示表型典型的家系中致病突變可能位于SHFM2或SHFM3位點(diǎn)。與正常個(gè)體相比，該家系全部患者都在SHFM3位點(diǎn)微衛(wèi)星多態(tài)標(biāo)記表現(xiàn)患者共享等位片段信號(hào)明顯增強(qiáng)，患者測(cè)序圖中該等位片段峰高明顯增加。這一現(xiàn)象表明患者發(fā)生SHFM3位點(diǎn)內(nèi)的DNA重復(fù)突變。在另一存在表現(xiàn)度變異的家系中，微衛(wèi)星標(biāo)記分析數(shù)據(jù)排除了其致病突變與SHFM2SHFM5四個(gè)位點(diǎn)連鎖的可能；而染色體7Q21區(qū)域STFM1位點(diǎn)內(nèi)有兩個(gè)標(biāo)記在00時(shí)，得到最大LOD值151，提示該家系致病突變可能位于該位點(diǎn)。綜上所述，我們首次在中國(guó)人SHFM家系患者中對(duì)五個(gè)SHFM位點(diǎn)進(jìn)行了微衛(wèi)星標(biāo)記基因型分析，以及SHFM3位點(diǎn)內(nèi)微衛(wèi)星標(biāo)記測(cè)序半定量分析。在一個(gè)SHFM家系中確定致病突變?yōu)槿旧w10Q243區(qū)域的DNA重復(fù)，在另一SHFM家系中獲得支持定位于染色體7Q21的連鎖分析結(jié)果。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)洳≥J～單位代碼Q3三5學(xué)號(hào)2Q21魚I至魚碩士學(xué)位論文⑧鮮食葡萄新品種‘鄞紅’的遺傳分析及其生物學(xué)特性研究研究生姓名崔鵬指導(dǎo)教師周偉軍教授、吳月燕教授專業(yè)名稱作物學(xué)所在學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院論文提交日期二。一一年十二月中國(guó)杭州浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文GENETICANALYSISANDBIOLOGICALCHARACTERIZATIONOFNEWTABLEGRAPECULTIVAR‘YINHONG’AUTHOR’SSIGNATURESUPERVISOR’SIGNATURETHESISREVIEWER1THESISREVIEWER2THESISREVIEWER3CHAIRMANZHANCOMMITTEE而MEMBER1MEMBER2MEMBER3PROLESSORZHEIIAN2UNIVERSIDATEOFORALDEFENCE22E魚塑級(jí)，2Q至

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文論文題目華東地區(qū)漢族群體20個(gè)插入缺失多態(tài)的群體遺傳學(xué)研究及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究生姓名江翔指導(dǎo)教師姓名謝芳高玉振專業(yè)名稱病理學(xué)研究方向分子遺傳學(xué)論文提交日期2015330

簡(jiǎn)介：山西大學(xué)2010屆碩士學(xué)位論文中華稻蝗AFLP遺傳多樣性及形態(tài)學(xué)研究作者姓名指導(dǎo)教師學(xué)科專業(yè)研究方向培養(yǎng)單位學(xué)習(xí)年限馬晉馬恩波教授動(dòng)物學(xué)動(dòng)物生化與分子生物學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2007年9月至2010年6月二。一O年六月煳刪目錄中文摘要I第一章前言111中華稻蝗的研究概況L111中華稻蝗的分類地位及形態(tài)特征L112中華稻蝗的生活習(xí)性及分布1113中華稻蝗的為害及治理”2114中華稻蝗的研究進(jìn)展312遺傳多樣性概述3121生物多樣性及遺傳多樣性的含義，3122種群遺傳結(jié)構(gòu)3123遺傳多樣性的現(xiàn)狀、喪失及維持413遺傳多樣性的研究方法及應(yīng)用4131形態(tài)學(xué)標(biāo)記4132細(xì)胞學(xué)標(biāo)記4133生化標(biāo)記5134分子標(biāo)記514本研究的目的和意義6第二章中華稻蝗不同地理種群遺傳多樣性及遺傳結(jié)構(gòu)分析921實(shí)驗(yàn)材料9211標(biāo)本采集9212主要儀器及試劑102121實(shí)驗(yàn)儀器LO2122實(shí)驗(yàn)試劑1022實(shí)驗(yàn)方法一11221模板DNA的提取與檢測(cè)11222模板DNA的限制性酶切和接頭連接12223預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)13224選擇性擴(kuò)增132241選擇性擴(kuò)增引物組合的篩選13

簡(jiǎn)介：目的血吸蟲病是一種流行廣泛、嚴(yán)重危害人類健康的人獸共患寄生蟲病。我國(guó)屬于血吸蟲病流行最嚴(yán)重的國(guó)家之一，主要流行日本血吸蟲病。日本血吸蟲的生活史比較復(fù)雜，在中間宿主（釘螺）體內(nèi)進(jìn)行無性生殖，在終宿主（哺乳動(dòng)物）體內(nèi)進(jìn)行有性生殖。個(gè)體遺傳學(xué)差異影響血吸蟲的交配選擇在終宿主體內(nèi)已有研究，然而有關(guān)于血吸蟲個(gè)體遺傳學(xué)差異是否影響其對(duì)終宿主的致病性，尚罕有研究。因此本實(shí)驗(yàn)利用微衛(wèi)星位點(diǎn)技術(shù)對(duì)日本血吸蟲成蟲DNA進(jìn)行基因分型，進(jìn)而分析日本血吸蟲配對(duì)個(gè)體間的遺傳差異性和雜合度差異，觀察配對(duì)個(gè)體間的遺傳學(xué)差異與其對(duì)終宿主致病性的關(guān)系。有助于深入了解血吸蟲的致病性和傳播特征，同時(shí)為進(jìn)一步有效地控制血吸蟲病流行提供新的思路。方法室內(nèi)單條毛蚴攻擊感染釘螺所形成的感染性釘螺，經(jīng)確定其逸出尾蚴的性別后，對(duì)相應(yīng)感染性釘螺逸出的雌雄尾蚴進(jìn)行隨機(jī)配對(duì)，即以1只釘螺逸出的雌性尾蚴5條和另1只釘螺逸出的雄性尾蚴10條感染BALBC小鼠，感染35D后收集血吸蟲蟲體、計(jì)數(shù)，計(jì)算肝重體重對(duì)成蟲、脾重體重對(duì)成蟲、平均每對(duì)成蟲肝臟沉積蟲卵數(shù)、平均每對(duì)成蟲腸組織沉積蟲卵數(shù)、肝臟蟲卵孵化率和肝臟肉芽腫的平均直徑。提取雌雄成蟲的DNA，應(yīng)用微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行標(biāo)記，進(jìn)行多重PCR，擴(kuò)增產(chǎn)物片段長(zhǎng)度由上海生物工程（生工）有限公司檢測(cè)。配對(duì)雌雄血吸蟲個(gè)體的遺傳相似性采用R系數(shù)估算，由軟件SPAGEDI14得到；雜合度為蟲體雜合位點(diǎn)數(shù)占蟲體所有位點(diǎn)數(shù)的比例，計(jì)算配對(duì)雌雄血吸蟲個(gè)體雜合度的差值（△H），即△H雄蟲雜合度雌蟲雜合度。結(jié)果1配對(duì)日本血吸蟲個(gè)體間的遺傳相似性與平均每對(duì)成蟲肝臟沉積蟲卵數(shù)（R05016，P00478）、平均每對(duì)成蟲腸組織沉積蟲卵數(shù)（R07965，P00002）、肝臟蟲卵孵化率（R05083，P00444），呈正相關(guān)，關(guān)聯(lián)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P005）。2配對(duì)日本血吸蟲個(gè)體間的雜合度差值△H的不同，△H0（雄蟲雜合度大于雌蟲）平均每對(duì)成蟲腸組織沉積蟲卵數(shù)和肝臟蟲卵孵化率，均顯著高于（分別為P00069、P00161）△H0；△H0肝重體重對(duì)成蟲和脾重體重對(duì)成蟲均顯著高于（分別為P00164、P00153）△H0；△H0、△H0在平均每對(duì)成蟲肝臟沉積蟲卵數(shù)和肝臟肉芽腫平均直徑，均沒有顯著性差異（P005）；病理指標(biāo)在△H0之間均沒有顯著性差異（P005）。結(jié)論1日本血吸蟲對(duì)其終宿主的致病性與配對(duì)個(gè)體間遺傳差異性有關(guān)，并且遺傳差異性越大，其致病性越弱?？赡苁且?yàn)檠x的致病性和傳播存在與基因相關(guān)的平衡作用，也可能與血吸蟲在中間宿主和終宿主體內(nèi)的增殖呈負(fù)相關(guān)有關(guān)。2日本血吸蟲配對(duì)個(gè)體間雜合度差異影響其在終宿主階段的傳播和致病性，雜合度有差異的雌雄蟲體配對(duì)，在終宿主階段的傳播率較高，而雜合度相等的雌雄蟲體配對(duì)，其致病性更強(qiáng)。3對(duì)遺傳差異性和雜合度差異的分析有助于深入了解日本血吸蟲在終宿主階段致病性和傳播的特征，也有助于為進(jìn)一步有效控制血吸蟲病流行提供新的思路。

簡(jiǎn)介：EXPLORINGBASICPROBLEMSINCONSERVATIONGENETICSOFWILDSOYBEANGLYCINESOJALADISSERTATIONSUBMITTEDTOFUDANUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFDOCTOROFPHILOSOPHYRUZHAO2007515●◆●目錄摘要IABSTRACTIII第一章前言11保護(hù)遺傳學(xué)的的研究?jī)?nèi)容及存在問題I11保護(hù)遺傳學(xué)的研究?jī)?nèi)容L12保護(hù)遺傳學(xué)研究研究中存在的一些問題42野生大豆保護(hù)遺傳學(xué)的研究背景821分類地位822形態(tài)特征823地理分布924野生大豆的重要價(jià)值LO25野生大豆保護(hù)遺傳學(xué)研究現(xiàn)狀113本研究的目的、意義和內(nèi)容1231研究目的1332研究意義1433研究?jī)?nèi)容15第二章遺傳多樣性的檢測(cè)與估算方法探討1721材料和方法18211實(shí)驗(yàn)材料18212DNA的提取18213AFLP分析19214ISSR分析20215SSR分析20216遺傳多樣性分析23

簡(jiǎn)介：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)博B學(xué)位論文里德聚類分析可以看出，紫色和紅色首先聚在一起，然后和紅白相間的聚在一起，最后與白色一串紅聚在一起，此結(jié)果和表面紋飾的分析結(jié)果大致相同。證明花粉在遺傳上具有較高的相關(guān)性?？梢宰鳛榉诸惖幕局笜?biāo)。10對(duì)四種花色一串紅進(jìn)行RAPD聚類圖分析，把4種花色一串紅劃分為兩大類，其聚類結(jié)果與孢粉學(xué)形態(tài)特征分類大致相同，因此，RAPD和孢粉學(xué)結(jié)合起來可作為一串紅親緣關(guān)系鑒定的一種有效手段。關(guān)鍵詞一串紅SAVIASPENDENSKERGAWL；生殖生物學(xué)孢粉學(xué)RAPDVII

簡(jiǎn)介：目的COMTRS4680位點(diǎn)功能多態(tài)性作用于腦結(jié)構(gòu)及功能的調(diào)控多是獨(dú)立進(jìn)行的，缺乏結(jié)合腦結(jié)構(gòu)和功能的多模態(tài)MRI全腦分析。同時(shí)，除了單基因作用外，還存在著與其他基因的交互作用。聯(lián)合多巴胺通路內(nèi)COMT和DRD2基因多態(tài)性的不同組合，形成不同多巴胺水平的亞組。通過分析COMT和DRD2的聯(lián)合基因效應(yīng)，采集大樣本健康青年被試腦結(jié)構(gòu)及靜息態(tài)功能數(shù)據(jù)，結(jié)合遺傳影像數(shù)據(jù)而探索多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)腦結(jié)構(gòu)及功能特性的調(diào)控模式及其內(nèi)在聯(lián)系，并分析對(duì)認(rèn)知行為、情感及人格的影響。本研究共采集323例健康青年被試，聯(lián)合運(yùn)用基于體素的形態(tài)學(xué)分析（VOXELBASEDMPHOMETRY，VBM）和靜息態(tài)功能連接（RESTINGSTATEFUNCTIONALCONNECTIVITY，RSFC），研究COMT和DRD2基因多態(tài)性對(duì)腦結(jié)構(gòu)（VBM）及功能（RSFC）的主效應(yīng)及交互效應(yīng)。材料與方法選擇右利手的漢族健康青年志愿者323例。利用GE30TSIGNAHDX磁共振掃描儀對(duì)所有受試者進(jìn)行腦結(jié)構(gòu)及靜息態(tài)功能數(shù)據(jù)的采集。1基因型測(cè)定，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（POLYMERASECHAINREACTIONPCR）連接酶檢測(cè)反應(yīng)（LIGATIONDETECTIONREACTIONLDR）的方法，檢測(cè)受試者COMT基因RS4680位點(diǎn)GA等位基因多態(tài)性以及DRD2基因RS1076560位點(diǎn)GT等位基因多態(tài)性。2采用基于MATLAB平臺(tái)的SPM8軟件及其插件包VBM8對(duì)高分辨率結(jié)構(gòu)像進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理過程包括灰、白質(zhì)分割、空間標(biāo)準(zhǔn)化及空間平滑。采用基于MATLAB平臺(tái)的DPARSF軟件對(duì)靜息態(tài)功能數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理過程包括時(shí)間校正、頭動(dòng)校正、空間標(biāo)準(zhǔn)化、重采樣到3MM3MM3MM的立方體素、空間平滑及帶通濾波。3利用一般線性模型檢測(cè)COMT和DRD2基因多態(tài)性對(duì)認(rèn)知行為，情感以及人格方面的基因主效應(yīng)及交互效應(yīng)。4采用預(yù)處理后的高分辨率結(jié)構(gòu)像數(shù)據(jù)，利用多元回歸模型及雙因素方差分析研究COMT和DRD2基因多態(tài)性作用于大腦灰質(zhì)體積的單基因主效應(yīng)及基因基因加性、非加性交互效應(yīng)。然后，提取交互作用顯著的腦區(qū)作為感興趣區(qū)，以保持腦結(jié)構(gòu)和功能分析的區(qū)域一致性，之后進(jìn)行基于感興趣區(qū)的全腦功能連接值計(jì)算。同樣地，我們研究COMT和DRD2基因多態(tài)性對(duì)感興趣區(qū)的功能連接改變的主效應(yīng)及交互效應(yīng)。5提取全腦灰質(zhì)體積中COMTDRD2呈顯著交互作用（加性及非加性）的腦區(qū)，對(duì)其大腦灰質(zhì)體積值和功能連接值做偏相關(guān)分析（控制性別、年齡、教育年限等協(xié)變量），探索腦結(jié)構(gòu)及功能特性之間的內(nèi)在聯(lián)系。6利用二次方回歸模型，分別依據(jù)COMT和DRD2而排列基因亞組，驗(yàn)證多巴胺系統(tǒng)對(duì)腦結(jié)構(gòu)和功能的擬合曲線是否顯著。7統(tǒng)計(jì)分析采用一般線性模型、單因素方差分析及雙因素方差分析（COMTDRD2），對(duì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果采用（GAUSSIANROMFIELD）GRF或（FAMILYWISEERR）FWE方法進(jìn)行多重比較校正。結(jié)果1利用SPSS一般線性模型（單變量）發(fā)現(xiàn)COMT和DRD2對(duì)認(rèn)知行為，情感以及人格方面均無顯著的主效應(yīng)及交互效應(yīng)。2雙因素方差分析發(fā)現(xiàn)全腦灰質(zhì)體積中存在COMT基因型主效應(yīng)的腦區(qū)主要存在于右側(cè)前扣帶回、中扣帶回、中央前回及額下回蓋部，相對(duì)于A等位基因攜帶者，GG純合子組灰質(zhì)體積顯著減小。3相同的多重比較閾值下，DRD2基因型對(duì)全腦灰質(zhì)體積無顯著主效應(yīng)。4雙因素方差分析發(fā)現(xiàn)右側(cè)背側(cè)前扣帶回的灰質(zhì)體積存在顯著的COMTDRD2非加性交互效應(yīng)。在6組基因亞組中（不同亞組反應(yīng)了假定的多巴胺水平），右側(cè)背側(cè)前扣帶回的灰質(zhì)體積呈倒“U”型分布。根據(jù)COMT和DRD2分別排列基因亞組，利用二次方回歸而擬合的調(diào)控曲線均是顯著的。5以右側(cè)背側(cè)前扣帶回區(qū)為種子區(qū)進(jìn)行全腦功能連接值計(jì)算。單樣本T檢驗(yàn)（FWE校正后P6以右側(cè)背側(cè)前扣帶回區(qū)為種子區(qū)進(jìn)行全腦功能連接值計(jì)算，我們發(fā)現(xiàn)右側(cè)背側(cè)前扣帶回區(qū)與右側(cè)楔前葉的功能連接存在顯著的COMTDRD2非加性交互效應(yīng)。在6組基因亞組中（不同亞組反應(yīng)了假定的多巴胺水平），右側(cè)背側(cè)前扣帶回區(qū)與右楔前葉之間靜息態(tài)功能連接呈“U”型分布。根據(jù)COMT和DRD2分別排列基因亞組，利用二次方回歸而擬合的調(diào)控曲線均是顯著的。7相同多重比較校正閾值下，COMT及DRD2基因?qū)Ω信d趣區(qū)的靜息態(tài)功能連接分析均無顯著的單基因主效應(yīng)。8我們檢驗(yàn)了右側(cè)背側(cè)前扣帶回的灰質(zhì)體積值與右側(cè)背側(cè)前扣帶回右側(cè)楔前葉功能連接值之間的PEARSON相關(guān)，發(fā)現(xiàn)存在顯著的負(fù)相關(guān)。9利用多元回歸模型，在全腦灰質(zhì)體積中，雖然我們并未發(fā)現(xiàn)顯著的基因間加性交互作用，但是我們?nèi)匀辉谟翌~下回的灰質(zhì)體積中發(fā)現(xiàn)加性交互作用的趨勢(shì)未通過相同閾值下的多重比較校正。事后分析表明右額下回的灰質(zhì)體積隨多巴胺水平增加而下降。10將存在COMTDRD2加性交互效應(yīng)趨勢(shì)的腦區(qū)（右額下回）作為種子區(qū)進(jìn)行全腦靜息態(tài)功能連接分析。單樣本T檢驗(yàn)FWE，P11相似地，我們檢驗(yàn)了右額下回的灰質(zhì)體積與右額下回右顳上回功能連接之間的PEARSON相關(guān)，發(fā)現(xiàn)存在顯著的負(fù)相關(guān)。結(jié)論1COMT和DRD2基因多態(tài)性對(duì)健康青年人認(rèn)知行為、情感以及人格方面無顯著作用。2COMT和DRD2基因多態(tài)性對(duì)腦結(jié)構(gòu)呈倒U型調(diào)控，符合多巴胺濃度對(duì)神經(jīng)元的生長(zhǎng)及發(fā)育作用所表現(xiàn)的倒U型曲線。3COMT和DRD2基因多態(tài)性對(duì)腦功能呈U型調(diào)控，由于基因的多態(tài)性，腦結(jié)構(gòu)有損害的健康青年人通過功能代償機(jī)制能夠維持正常的行為表現(xiàn)。4COMT和DRD2基因多態(tài)性對(duì)腦結(jié)構(gòu)及功能的調(diào)控并不是相對(duì)獨(dú)立的，是呈負(fù)向相關(guān)的。

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文一個(gè)先天性外胚葉發(fā)育不全家系的分子遺傳學(xué)研究姓名楊琴波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師劉木根王擎20070521IIABSTRACTHYPOHIDROTICECTODERMALDYSPLASIAHEDISASYNDROMEWHICHFOUNDTOOCCURWLDWIDEWITHANESTIMATEDINCIDENCEOF1PER100000BIRTHSECTODERMALDYSPLASIASTYPICALLYAFFECTTHEHAIRTEETHNAILSSKINHEDISPRIMARILYACTERIZEDBYTHEPARTIALCOMPLETEABSENCEOFCERTAINSWEATGLSECCRINEGLSCAUSINGTHELACKOFDIMINISHEDSWEATINGANHIDROSISHYPOHIDROSISHEATINTOLERANCEFEVERABNMALLYSPARSEHAIRHYPOTRICHOSISTHEABSENCEANODONTIAHYPODONTIAMALFMATIONOFCERTAINTEETHITCANBEINHERITEDINAUTOSOMALDOMINANTAUTOSOMALRECESSIVEXLINKEDPATTERNSHOWEVERXLINKEDHEDXLHEDISTHEMOSTCOMMONFMOFHEDIFUNRECOGNIZEDXLHEDISONEOFTHECAUSESOFFEVEROFUNKNOWNIGINREPEATEDBRONCHITISSUDDENDEATHDURINGINFANCYEARLYCHILDHOODMUTATIONSINEIGHTGENESWEREIDENTIFIEDTOCAUSEHYPOHIDROTICECTODERMALDYSPLASIAINCLUDINGSIXGENESWHICHARERESPONSIBLEFAUTOSOMALHYPOHIDROTICECTODERMALDYSPLASIATWOGENESFXLHEDMUTATIONSINTHEEDAGENEWHICHENCODESECTODYSPLASINAARERESPONSIBLEFXLINKEDHEDXLHEDWHEREASMUTATIONSINTHEIKBKGGENEWHICHENCODESNFKAPPABESSENTIALMODULATNEMOMAYCAUSEBOTHHYPOHIDROTICECTODERMALDYSPLASIAIMMUNODEFICIENCYHEDIDINTHEPRESENTSTUDYWECLINICALLYIDENTIFIEDACHINESEHANFAMILYWITHXLHEDBUTNOIMMUNODEFICIENCYLINKAGEANALYSISOFTHECHINESEXLHEDFAMILYWITHTWOKNOWNGENESEDAIKBKGONCHROMOSOMEXSUGGESTEDTHATTHEEDAGENEWASRESPONSIBLEFTHEDISEASEPHENOTYPETHENDIRECTDNASEQUENCEANALYSISOFTHEENTIRECODINGREGIONEXON–INTRONBOUNDARIESOFEDAIDENTIFIEDANOVELMUTATIONC573_574INSTINTWOAFFECTEDMALESONECARRIERFEMALERESTRICTIONFRAGMENTLENGTHPOLYMPHISMRFLPANALYSISSHOWEDTHATTHEMUTATIONWASNOTPRESENTIN200CONTROLSTHE1BPIONMUTATIONRESULTEDINAFRAMESHIFTWHICHCAUSESPREMATURETERMINATIONOFEDAPOLYPEPTIDE

簡(jiǎn)介：很多因素可以導(dǎo)致藥物反應(yīng)個(gè)體差異例如年齡、性別、疾病狀態(tài)和遺傳等。遺傳藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)藥物代謝酶、受體和轉(zhuǎn)運(yùn)體的遺傳多態(tài)性是藥物反應(yīng)個(gè)體差異的決定因素。普拉克索是臨床用于治療帕金森病的多巴胺受體激動(dòng)劑。它為新型的非麥角堿類多巴胺受體激動(dòng)劑對(duì)多巴胺D2類受體具有高度選擇性對(duì)D2類受體的親和力依次為D3＞D2＞D4。目前對(duì)早期的帕金森病患者提倡首選多巴胺受體激動(dòng)劑治療晚期可與左旋多巴合用這樣可以盡量延緩左旋多巴開始治療的時(shí)間和減少左旋多巴的劑量以避免由于長(zhǎng)期使用左旋多巴導(dǎo)致的療效衰退以及引起癥狀波動(dòng)、運(yùn)動(dòng)障礙和精神癥狀等不良反應(yīng)而且普拉克索對(duì)多巴胺神經(jīng)有保護(hù)作用可大大延緩病情的發(fā)展。普拉克索的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)為吸收迅速約2小時(shí)達(dá)到血藥濃度高峰生物利用度高于90％食物對(duì)普拉克索的吸收影響很小其在體內(nèi)分布廣泛表觀分布容積約為500L與血漿蛋白的結(jié)合率約為15％半衰期在健康的年輕人平均為8小時(shí)在老年人大概為12小時(shí)。普拉克索的消除途徑主要是通過腎臟90％以原型從腎臟分泌排泄。研究表明普拉克索在腎臟的分泌主要由有機(jī)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體2GANICCATIONTRANSPTER2OCT2介導(dǎo)。但普拉克索在臨床實(shí)際應(yīng)用中存在顯著的個(gè)體差異。由于它不被酶代謝所以有機(jī)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體2和它作用的靶受體DRD2和DRD3的遺傳多態(tài)性是導(dǎo)致它個(gè)體差異的重要因素。OCT2是腎臟表達(dá)最豐富的一種有機(jī)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體其底物包括體內(nèi)多種生物活性物質(zhì)和多種藥物如多巴胺、二甲雙胍、金剛烷胺、西咪替丁等。近年來OCT2基因上已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)多個(gè)單核苷酸多態(tài)性SNP但很多SNP都存在顯著的種族差異性例如LEABMAN的研究發(fā)現(xiàn)M165I和R400C兩種突變只出現(xiàn)在非裔美國(guó)人中K432Q突變?cè)诜且崦绹?guó)人和墨西哥裔美國(guó)人存在而A270S突變?cè)诓煌N族中都存在并且頻率高達(dá)127％。進(jìn)一步功能研究顯示M165I和R400C兩種突變顯著降低了蛋白的最大轉(zhuǎn)運(yùn)速率。R400C和K432Q突變顯示出對(duì)抑制劑TBA的敏感性增強(qiáng)而突變頻率最高的A270S突變對(duì)抑制劑TBA的敏感性減弱。韓國(guó)研究者ISSONG的研究發(fā)現(xiàn)A270S突變導(dǎo)致轉(zhuǎn)運(yùn)體最大轉(zhuǎn)運(yùn)速率VMAX與野生型相比顯著降低在健康受試者的臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該突變影響二甲雙胍的藥代動(dòng)力學(xué)特征突變后AUC和CMAX都顯著升高CLF顯著降低并且呈現(xiàn)基因劑量效應(yīng)。多巴胺受體DR屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族。目前已知有五種DRD1～D5根據(jù)生化反應(yīng)和藥理生理特性的不同將五種DR分為D1類和D2類受體。D1類受體包括D1和D5興奮時(shí)激活腺苷酸環(huán)化酶使CAMP水平增加D2類受體包括D2、D3和D4興奮時(shí)抑制腺苷酸環(huán)化酶使CAMP水平降低。圍繞DR和帕金森病的研究主要集中在D2和D3。多巴胺受體D2DRD2存在以下幾個(gè)突變啟動(dòng)子區(qū)141CINSDEL突變TAQ1ARFLP內(nèi)含子2中的CAN二核苷酸短串聯(lián)重復(fù)多態(tài)性及三個(gè)錯(cuò)義突變SER311CYSPRO310SERVAL96A1A。功能研究顯示在TAQ1A多態(tài)性位點(diǎn)攜帶A1等位基因的個(gè)體其紋狀體DRD2受體密度降低并且影響與底物結(jié)合的特異性DRD3基因位于3號(hào)染色體。目前已發(fā)現(xiàn)的突變有SER9GLY和位于第5內(nèi)含子的MSPIRFLP。SER9GLY突變位于DRD3蛋白胞外的氨基端對(duì)蛋白嵌入胞膜有影響后又有研究表明9GLY突變?cè)鰪?qiáng)受體與多巴胺的親和力。基于以上研究背景本課題旨在查明OCT2808G＞T突變?cè)诮】等撕团两鹕颊叩姆植继卣髟撏蛔兪欠衽c帕金森病的遺傳易患性相關(guān)通過嚴(yán)謹(jǐn)?shù)呐R床實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)查明OCT2808G＞T突變?cè)诮】凳茉囌邔?duì)治療帕金森病藥物普拉克索藥代動(dòng)力學(xué)的影響通過嚴(yán)謹(jǐn)?shù)呐R床實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)研究DRD2和DRD3常見遺傳突變對(duì)普拉克索在帕金森病人藥效的影響。本課題的主要研究結(jié)果如下1在漢族健康志愿者OCT2808G＞T突變的T等位基因頻率為114％在原發(fā)性帕金森病患者突變的T等位基因頻率為31％顯著低于健康人群。表明OCT2808G＞T突變與帕金森病的遺傳易患相關(guān)該突變對(duì)帕金森病來說可能是一遺傳保護(hù)因子。2建立簡(jiǎn)單、靈敏的LCMSMS方法檢測(cè)體內(nèi)鹽酸普拉克索血藥濃度。3OCT2808G＞T基因多態(tài)性影響普拉克索的藥代特點(diǎn)。攜帶突變等位基因的受試者組普拉克索的CMAX和AUC顯著高于野生型純和子組口服清除率則顯著低于野生型純和子組。4在中國(guó)的帕金森患者中DRD3SER9GLY多態(tài)性和普拉克索的療效顯著相關(guān)突變后有效率顯著降低DRD2TAQ1A多態(tài)性與普拉克索的療效無顯著相關(guān)。但需要更大范圍和多劑量的臨床試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證多巴胺受體遺傳多態(tài)性對(duì)普拉克索療效的影響?？傊卷?xiàng)目從分子水平、健康受試者和臨床病人水平對(duì)普拉克索的藥物反應(yīng)個(gè)體差異提供了遺傳藥理水平的解釋為臨床合理應(yīng)用普拉克索提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論指導(dǎo)服用普拉克索的帕金森患者先行進(jìn)行OCT2、DRD2和DRD3基因型檢測(cè)可能在獲得更好的療效及避免不良反應(yīng)等方面有優(yōu)勢(shì)。

簡(jiǎn)介：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書學(xué)位論文不如需保密，解密時(shí)間年月日是否保密口IIMYIIIH32IIULLIH7114HOIL5IIIIIII獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包合為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意。研姓懿王鏘時(shí)間加，7年石月伸日學(xué)僦黼撕王權(quán)軍膨簽名日期。加1年6月驢簽名日期占夕年／月／歸

簡(jiǎn)介：遺傳病是由基因組中的一個(gè)或多個(gè)異常引起的遺傳問題，往往在出生時(shí)就被決定了（先天性），也可后天發(fā)病。如遺傳性痙攣性截癱、遺傳性進(jìn)行性假性類風(fēng)濕發(fā)育不良癥、多囊腎病等，完全由遺傳因素決定發(fā)病，但是要經(jīng)過幾年、十幾年甚至幾十年才能出現(xiàn)明顯的癥狀。大多數(shù)遺傳性疾病是相當(dāng)罕見的，發(fā)病率為幾千到幾百萬(wàn)分之一。單基因遺傳病是指由單一一個(gè)基因突變導(dǎo)致的疾病?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)了有超過6500種的單基因遺傳病。單基因疾病可以通過幾種途徑傳遞給后代。常染色體顯性遺傳病位于常染色體上的兩個(gè)等位基因中，如有一個(gè)突變，這個(gè)突變基因的異常效應(yīng)就能顯示發(fā)病。這類疾病已達(dá)1700多種，如家族性多發(fā)性結(jié)腸息肉等。其遺傳系譜特點(diǎn)是遺傳與性別無關(guān)，男女發(fā)病機(jī)會(huì)均等患者雙親往往有一方為患者常見連續(xù)幾代的遺傳。顯性致病基因有時(shí)由于內(nèi)外環(huán)境的影響，雜合子個(gè)體攜帶顯性致病基因但并不表達(dá)，即不完全外顯。常染色體顯性遺傳病的外顯率為60％90％。常染色體隱性遺傳病致病基因?yàn)槲挥诔Ｈ旧w上的隱性基因，當(dāng)隱性基因純合時(shí)才能發(fā)病。即隱性遺傳病患者，大多是由兩個(gè)攜帶者所生的后代。已確定這類疾病約1200多種，如先天性聾啞、白化病、苯丙酮尿癥。常染色體隱性遺傳病的譜系特點(diǎn)男女發(fā)病機(jī)會(huì)均等，發(fā)病與性別無關(guān)常是越代遺傳近親婚配時(shí)，子女中隱性遺傳病患病率大為增高。性染色體連鎖遺傳病SEXLINKEDDISDER包括X連鎖遺傳病和Y連鎖遺傳病。以X連鎖隱性遺傳病為多見，致病基因在X染色體上，性狀是隱性的，女性大多只是攜帶者X連鎖顯性遺傳病病種較少，這類病女性發(fā)病率高，但病情較男性輕Y連鎖遺傳病的特點(diǎn)是男性傳遞給兒子，女性不發(fā)病，Y連鎖遺傳病極少見。常染色體顯性多囊腎病AUTOSOMALDOMINANTPOLYCYSTICKIDNEYDISEASE，ADPKD是一種常見的遺傳性腎病，以逐漸增多、增大的雙邊腎臟囊腫為主要特點(diǎn)，并最終能導(dǎo)致腎衰竭。它在全世界范圍的發(fā)病率大約在1400至11000之間，并且占了晚期腎移植病人的5％10％。腎臟外也會(huì)出現(xiàn)一些癥狀，主要是其它上皮器官如肝和胰腺的囊腫。此外，有些ADPKD病人有些還會(huì)表現(xiàn)出結(jié)締組織的缺陷，如顱內(nèi)動(dòng)脈瘤。脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)SPINOCEREHENARATAXIA，SCAS是一類包括多種亞型在內(nèi)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，具有高度的遺傳異質(zhì)性，往往在成年期發(fā)病。常見的損害部位包括了從主要的神經(jīng)系統(tǒng)（小腦、腦干、脊髓、周圍神經(jīng)等）到神經(jīng)系統(tǒng)之外的部位（眼、骨骼、心臟等），臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣。影像學(xué)檢查主要表現(xiàn)為小腦皮質(zhì)的逐漸萎縮。在本研究中，我們采集到了兩個(gè)常染色體顯性遺傳的單基因病家系，對(duì)上述兩種單基因遺傳病進(jìn)行了分子遺傳學(xué)研究，檢查了相關(guān)致病基因并鑒定了致病突變。所進(jìn)行的相關(guān)研究為上述疾病的病理生理學(xué)機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)也為家系中成員的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供了保障。第一部分一個(gè)顯性多囊腎病家系的致病基因突變分析多囊腎病POLYCYSTICKIDNEYDISEASE，PKD是一種嚴(yán)重影響生活甚至威脅生命的單基因遺傳病。它的主要臨床癥狀是腎臟出現(xiàn)許多充滿液體的囊腫。多囊腎病人表現(xiàn)出進(jìn)行性的囊腫形成和腫大、腎臟腫大，最終發(fā)展成晚期腎衰竭。此病主要分為常染色體顯性遺傳ADPKD和常染色體隱性遺傳ARPKD。常染色體顯性多囊腎病AUTOSOMALDOMINANTPOLYCYSTICKIDNEYDISEASE，ADPKD是一種常見的遺傳性腎病，發(fā)病率在1500到11000之間。以逐漸增多、增大的雙邊腎臟囊腫為主要特點(diǎn)，并最終能導(dǎo)致腎衰竭。腎外臨床表現(xiàn)包括其它上皮器官的囊腫，例如肝、脾，病人也表現(xiàn)出結(jié)締組織缺陷，例如顱內(nèi)動(dòng)脈瘤、心瓣膜異常、夾層動(dòng)脈瘤、腹壁疝，高血壓是ADPKD非常常見的癥狀。ADPKD患者的腎功能會(huì)逐漸喪失。ADPKD有兩個(gè)已鑒定的致病基因PKD116P133編碼多囊蛋白1POLYCYSTIN1，PC1和PKD24Q22編碼多囊蛋白2POLYCYSTIN2，PC2。PKD1突變導(dǎo)致的多囊腎病占全部多囊腎病的85％，剩下的15％由PKD2基因上的致病突變導(dǎo)致，而且PKD1突變導(dǎo)致的多囊腎往往比PKD2突變導(dǎo)致的癥狀更為嚴(yán)重。此外，多囊腎的癥狀和嚴(yán)重程度在不同的患者甚至在同一個(gè)家系的不同患者之間往往都有很大的不同，這表明多囊腎的病程可能受其他基因或環(huán)境因素的影響。ALPT綜合癥ALPTSYNDROME，AS也是一種遺傳性腎病，發(fā)病率至少為150000。它常常在兒童期起病并表現(xiàn)為鏡下血尿，隨后隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸出現(xiàn)肉眼血尿、蛋白尿和腎功能不全，并最終在成年期形成腎功能衰竭。部分病人會(huì)有腎臟外的癥狀，主要包括逐漸的耳聾、視覺障礙。ALPT綜合癥主要由X連鎖的COL4A5基因突變導(dǎo)致（占85％），為顯性致病剩下的15％由常染色體隱性突變導(dǎo)致。我們?cè)谀戏结t(yī)院發(fā)現(xiàn)了一個(gè)含有3代人的多囊腎病家系，家系共有5名已知患病成員，初步考慮此家系為常染色體顯性多囊腎病。我們對(duì)該家系做了臨床分析和相關(guān)的檢查，采集了家系成員的DNA樣本，并得到了先證者的腎組織樣本。通過對(duì)先證者的全基因組二代測(cè)序我們得到了其可能致病的PKD1致病突變，此突變?yōu)橐拼a突變并與家系中的患者出現(xiàn)了共分離。同時(shí)在家系中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)被注釋為致病的COL4A5突變G953VRS78972735，此基因突變會(huì)導(dǎo)致更為嚴(yán)重的ALPT綜合癥。通過對(duì)比PKD1基因編碼的蛋白PC1在先證者組織和正常組織中的差異，發(fā)現(xiàn)病人的晚期衰竭腎臟中的PC1的表達(dá)提高了約17倍組織免疫化學(xué)也提示在患者膨大的小管上皮有明顯的表達(dá)提高。同時(shí)PS6S6比例的提高和KI67陽(yáng)性細(xì)胞增多提示了患者小管上皮處于高增值的狀態(tài)但TUNEL實(shí)驗(yàn)顯示患者的腎臟的凋亡細(xì)胞也明顯增多了這表明患者的腎臟組織處于一種同時(shí)高增殖高凋亡的重構(gòu)過程。一些機(jī)制重構(gòu)相關(guān)基因的表達(dá)量的顯著提高也反與晚期腎臟出現(xiàn)的纖維化情況吻合。通過分析家系中COL4A5突變攜帶者的臨床表現(xiàn)，我們發(fā)現(xiàn)此COL4A5突變?cè)诩蚁抵胁]有導(dǎo)致ALPT綜合癥，同時(shí)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)也有矛盾的地方分析報(bào)道此突變的文獻(xiàn)我們發(fā)現(xiàn)只有一例此COL4A5單獨(dú)突變致病的患者，患者病情比通常點(diǎn)突變患者的情況嚴(yán)重很多并且在調(diào)查中沒有檢測(cè)此基因的重排。所以，我們認(rèn)為單獨(dú)的COL4A5G953V突變可能是不致病的。該家系新的PKD1致病突變的發(fā)現(xiàn)，為該家系今后的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷服務(wù)提供了便利。第二部分一個(gè)脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)家系的致病基因突變分析脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)SPINOCEREHENARATAXIA，SCAS，是一類包括多種亞型在內(nèi)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。常見的損害部位包括了從主要的神經(jīng)系統(tǒng)（小腦、腦干、脊髓、周圍神經(jīng)等）到神經(jīng)系統(tǒng)之外的部位（眼、骨骼、心臟等），臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣。其主要的臨床特征為初期隱襲起病，走路時(shí)步履不穩(wěn)，肢體搖晃，動(dòng)作反應(yīng)遲緩及準(zhǔn)確性變差中期逐漸發(fā)展為說話時(shí)發(fā)音含糊不清，無法控制音調(diào)，眼球轉(zhuǎn)動(dòng)不平順，影像容易產(chǎn)生重疊，肌肉不協(xié)調(diào)感加重，無法寫字，有時(shí)感到吞咽困難晚期時(shí)說話極不清楚，甚至無法語(yǔ)言，肢體乏力，不能站立，需靠輪椅代步，理解能力逐步下降，最后失去意識(shí)，昏睡不醒。影像學(xué)檢查主要表現(xiàn)為小腦皮質(zhì)的逐漸萎縮。SCAS臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，基因分型是唯一確切有效的分類方法。按遺傳方式，SCAS可以分為常染色體顯性、常染色體隱性和X連鎖隱性三類。其中以常染色體顯性最為常見，到目前為止，已經(jīng)有大約35個(gè)位點(diǎn)被定位出來，并被分類為3個(gè)大的類型1編碼區(qū)CAG三核苷酸重復(fù)增多導(dǎo)致的多聚谷氨酰胺性共濟(jì)失調(diào)，主要包括SCA3、SCA6和SCA72非編碼區(qū)重復(fù)序列增多導(dǎo)致的共濟(jì)失調(diào)3傳統(tǒng)突變（移碼、錯(cuò)義突變、無義突變、剪切突變等）和拷貝數(shù)變異導(dǎo)致的共濟(jì)失調(diào)。常染色體隱性遺傳相對(duì)少見，主要是FREIDREICH病，在西方人中相對(duì)多見，國(guó)內(nèi)罕見。但是即使發(fā)現(xiàn)了如此多的致病基因，仍然有40％左右的SCAS患者找不到致病原因，說明仍然存在未發(fā)現(xiàn)的致病基因，而且?guī)缀趺磕甓加行碌闹虏』虮话l(fā)現(xiàn)。我們?cè)谥榻t(yī)院發(fā)現(xiàn)了一個(gè)脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)家系，家系中共有4名已知患者并呈現(xiàn)明顯的顯性遺傳。家系中的患者具有典型的脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)癥狀，發(fā)病年齡在40歲左右。先證者最初出現(xiàn)不明原因的步行不穩(wěn)，走路及站立時(shí)，身體向雙邊倒，步行緩慢，起立困難，隨后癥狀進(jìn)行性加重。雙下肢淺感覺減退，雙上肢橈骨膜、肱二、三頭肌反射減弱。雙下肢膝、跟腱反射消失。MRI顯示雙側(cè)小腦萎縮，腰34及腰45椎間盤終板周圍炎。在研究病人的癥狀和中國(guó)SCAS流行病學(xué)調(diào)查的結(jié)果后，我們決定優(yōu)先篩查家系SCA3、SCA1、SCA3、SCA6、SCA7的基因突變。在隨后的電泳和毛細(xì)管電泳中我們發(fā)現(xiàn)家系中患者的SCA3基因CAG拷貝數(shù)超出了正常閾值分別為Ⅲ12768次Ⅲ32768次，而年齡相符的家系正常人沒有超過。同時(shí)在家系中發(fā)現(xiàn)了3名未到發(fā)病年齡的潛在患者，分別為Ⅲ41468次Ⅳ81468次Ⅳ102971次。我們的發(fā)現(xiàn)為家系成員之后的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷奠定了基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)S722密級(jí)公開UDC630全日制碩士專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文全日制碩士專業(yè)學(xué)位研究生學(xué)位論文薄殼山核桃薄殼山核桃種質(zhì)資源種質(zhì)資源生物學(xué)特性生物學(xué)特性研究研究及遺傳多樣性及遺傳多樣性分析分析作者姓名作者姓名李健指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師王正加專業(yè)學(xué)位專業(yè)學(xué)位名稱名稱農(nóng)業(yè)推廣碩士農(nóng)業(yè)推廣碩士領(lǐng)域領(lǐng)域名稱名稱林業(yè)研究方向研究方向林木遺傳育種林木遺傳育種所在學(xué)院所在學(xué)院林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院論文提交日期論文提交日期2018年1月浙江農(nóng)林大學(xué)2018年1月18日Z(yǔ)HEJIANGAGRICULTUREFESTRYUNIVERSITYMASTERDEGREETHESISRESEARCHABOUTBIOLOGICALACTERISTICSGEICDIVERSITYOFGERMPLASMRESOURCESOFCARYAILLINOENSISCIADATELIJIANADVISERWANGZHENGJIASPECIALITYGEICSBREEDINGOFFESTTREESDATEOFSUBMISSIONJANUARY2018ZHEJIANGAFUNIVERSITYLIN’ANZHEJIANGPROVINCEPRCHINAJANUARY2018

簡(jiǎn)介：分類號(hào)￡絲二UDC碩士學(xué)位論文密級(jí)I類新城疫病毒NP和P基因分子流行病學(xué)研究及NDV08004株反向遺傳操作系統(tǒng)的建立陳云霞論文答辯日期2Q生墨旦墨Q旦學(xué)位授予日期答辯委員會(huì)主席星廷苤教援I類新城疫病毒NP和P基因分子流行病學(xué)研究及NDV08004株反向遺傳操作系統(tǒng)的建立摘要本研究通過對(duì)2008一2010年分離到的60株I類新城疫病毒分離株的NP和P蛋白基因進(jìn)行分子流行病學(xué)分析，基本掌握了我國(guó)目前I類新城疫病毒的分子特征。通過構(gòu)建I類新城疫病毒代表株NDV08004全長(zhǎng)感染性EDNA克隆，并成功拯救出重組病毒，為I類新城疫病毒的致病機(jī)理和相關(guān)蛋白的功能研究奠定了基礎(chǔ)。1I類新城疫病毒NP基因分子特征的研究本研究對(duì)20082010年分離到的60株I類新城疫病毒的NP基因進(jìn)行了分子特征和遺傳進(jìn)化關(guān)系分析，結(jié)果表明所有I類新城疫病毒分離株完整NP基因的長(zhǎng)度均為1746BP，編碼區(qū)長(zhǎng)度為1470NT，可編碼489個(gè)氨基酸。通過多序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)I類NDV在NP蛋白基因上的特征性位點(diǎn)，如D460E，和468T。同源性分析結(jié)果顯示，I類與II類NDV的NP蛋白氨基酸同源性在880％一，927％之間，核苷酸同源性在752％795％之間。遺傳進(jìn)化樹分析表明60株I類NDV分離株可分為兩個(gè)不同的亞型，兩個(gè)亞型之間NP蛋白氨基酸差異在27％～41％之間，核苷酸差異在46％，79％之間。2I類新城疫病毒P基因分子特征的研究通過對(duì)60株I類NDV分離株P(guān)基因的擴(kuò)增和分子遺傳進(jìn)化關(guān)系分析，結(jié)果表明所有的分離株P(guān)基因長(zhǎng)度均為1463BP，編碼區(qū)長(zhǎng)度為1200NT，可編碼399個(gè)氨基酸。通過多序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)I類NDV在P蛋白基因上的特

簡(jiǎn)介：慢性胰腺炎（CHRONICPANCREATITIS，CP）是一種進(jìn)展性、不可逆的胰腺外分泌及內(nèi)分泌組織損毀性病變，最終導(dǎo)致胰腺顯著的外分泌功能損害（消化不良）和糖尿病。在西方國(guó)家，酗酒是慢性胰腺炎的最常見病因，占全部慢性胰腺炎的70％～90％。其他病因包括基因突變、熱帶性慢性胰腺炎，胰管梗阻，高甘油三脂血癥，高鈣血癥及自身免疫性胰腺炎等等。一部分無明確病因者稱為特發(fā)性慢性胰腺炎（IDIOPATHICCHRONICPANCREATITIS，ICP）。近年來，隨著人們對(duì)于基因及環(huán)境因素的深入分析研究，特發(fā)性慢性胰腺炎的病例正逐漸減少。因此，進(jìn)行陽(yáng)離子胰蛋白酶原基因（CATIONICTRYPSINOGENGENE，PRSS1）、絲氨酸轉(zhuǎn)肽酶抑制劑KAZALTYPE1（SERINEPROTEASEINHIBITKAZALTYPE1，SPINK1）等基因的測(cè)序?qū)τ谏钊肓私馕覈?guó)慢性胰腺炎患者病因及發(fā)病機(jī)制有著重大作用。我們首先對(duì)慢性胰腺炎患者進(jìn)行PRSS1及SPINK1測(cè)序以尋找中國(guó)大陸漢族人群慢性胰腺炎的常見突變位點(diǎn)，并試圖從基因組學(xué)層面探討其發(fā)病機(jī)制。雖然YTCHANG等人通過基因測(cè)序后的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出早發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者較晚發(fā)者有著更高的SPINK1基因突變率，但是在我們的實(shí)驗(yàn)中卻發(fā)現(xiàn)存在同一基因突變的特發(fā)性胰腺炎也有晚發(fā)的情況，并且具有同一突變的同卵雙生子之間發(fā)病時(shí)間也可相差30年以上。這些問題僅憑之前的研究無法解釋，因此，本研究針對(duì)這一問題進(jìn)行了深入的基因組學(xué)以及調(diào)控組學(xué)研究。我們首利用ELISA對(duì)突變進(jìn)行功能驗(yàn)證。并進(jìn)一步利用雙向差異凝膠電泳及生物信息學(xué)方法對(duì)早發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者及晚發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者進(jìn)行血漿差異蛋白質(zhì)篩選及其相關(guān)MICRNA預(yù)測(cè)，結(jié)合芯片篩選到的早發(fā)型及晚發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者血漿差異MICRNA，通過體外實(shí)驗(yàn)最終揭示可能參與特發(fā)性胰腺炎早發(fā)的因素。通過TIGARO系統(tǒng)對(duì)中國(guó)大陸漢族慢性胰腺炎患者進(jìn)行分類，并結(jié)合基因檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)遺傳性胰腺炎符合既往國(guó)外研究結(jié)果，特發(fā)性胰腺炎的C1942TC突變位點(diǎn)與中國(guó)臺(tái)灣人群相似，且突變率很高（466％），并傾向早發(fā)。我們通過對(duì)一對(duì)發(fā)病時(shí)間相差30年又具有C1942TC突變的同卵雙生子的血漿進(jìn)行雙向差異凝膠電泳，結(jié)果表明早發(fā)者與晚發(fā)者血漿中存在差異蛋白，其中包括血漿谷胱甘肽過氧化物酶（PLASMAGLUTATHIONEPEROXIDASE，GPX3），早發(fā)者血漿GPX3表達(dá)量明顯低于晚發(fā)者。我們的研究中發(fā)現(xiàn)早發(fā)型ICP血漿人8羥基脫氧鳥苷（8HYOHOXYDEOXYGUANOSINE，8OHDG）和丙二醛（MALONDIALDEHYDE，MDA）較晚發(fā)型ICP明顯上調(diào)，并且早發(fā)型ICP與晚發(fā)型ICP較正常人群均明顯上調(diào)檢測(cè)結(jié)果表明早發(fā)者的氧化損傷程度較晚發(fā)者及正常人群均嚴(yán)重。因此我們推測(cè)早發(fā)型ICP患者GPX3的低表達(dá)降低了其對(duì)于機(jī)體氧化損傷的保護(hù)作用，而這可能是特發(fā)性胰腺炎早發(fā)的一個(gè)重要原因。MIRNA芯片結(jié)果表明早發(fā)型特發(fā)性胰腺炎與晚發(fā)型特發(fā)性胰腺炎患者血漿中HASMIR453有明顯差異，早發(fā)型患者血漿HASMIR453表達(dá)量高于晚發(fā)型。通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，HASMIR453可能參與GPX3的調(diào)節(jié)。因此我們進(jìn)行了體外實(shí)驗(yàn)，通過熒光素酶報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn)HASMIR453的上調(diào)的確可以導(dǎo)致GPX3的低表達(dá)?；谝陨辖Y(jié)果，我們認(rèn)為HASMIR453上調(diào)，導(dǎo)致其血漿谷胱甘肽過氧化物酶表達(dá)量降低，引發(fā)機(jī)體抗氧化保護(hù)機(jī)制的減弱，從而參與了特發(fā)性胰腺炎的早發(fā)。因此，本實(shí)驗(yàn)中，我們提出了SPINK1基因上C1942TC突變并非特發(fā)性胰腺炎的早發(fā)的唯一原因，HASMIR453的上調(diào)所引發(fā)的GPX3低表達(dá)使得抗氧化保護(hù)機(jī)制降低也可能是參與ICP早發(fā)的因素之一。由于慢性胰腺炎病因復(fù)雜，發(fā)病的確切機(jī)制尚未完全闡明，因此慢性胰腺炎的治療仍是目前的難題之一。慢性胰腺炎的內(nèi)鏡治療原則是以胰液流出梗阻所造成的胰管高壓和胰腺實(shí)質(zhì)壓力增高而導(dǎo)致的腹痛為前提。狹窄，結(jié)石及胰管中斷是造成慢性胰腺炎胰管梗阻的三大主要原因。以往，對(duì)于經(jīng)內(nèi)鏡逆行胰膽管造影（ENCOSCOPICRETROGRADECHOLANGIOPANCREATOGRAPHYERCP）失敗或無法行ERCP治療的患者來說，只能行外科手術(shù)或保守治療。但是我們對(duì)于復(fù)雜的慢性胰腺炎的介入治療做了大膽嘗試率先為一名胰十二指腸切除術(shù)后出現(xiàn)嚴(yán)重胰管擴(kuò)張并發(fā)癥的患者進(jìn)行了超聲內(nèi)鏡引導(dǎo)下經(jīng)胃壁胰管穿刺置管引流術(shù)，并取得了明顯療效。論文主要分為以下四個(gè)部分第一章對(duì)中國(guó)大陸漢族人群慢性胰腺炎進(jìn)行了基因分析；第二章分析了中國(guó)大陸人群特發(fā)性胰腺炎的發(fā)病早晚可能與GPX3及HASMIR453的表達(dá)有關(guān)；第三章講述了我們首次嘗試在EUS引導(dǎo)下經(jīng)胃壁胰管穿刺置管引流治療WHIPPLE術(shù)后慢性胰腺炎胰管高壓患者；最后為文獻(xiàn)綜述，介紹了慢性胰腺炎病因構(gòu)成、治療研究進(jìn)展及慢性胰腺炎與胰腺癌的關(guān)系。